离心后重悬问题

不苦的药

采用全骨髓贴壁法提取骨髓间充质干系包，遇到几个问题
# }3 a; |. H8 _1 冲出骨髓直接离心后进行重悬，一般吹打多少次比较好呢？& \! ^! l/ Y- C& J. ]
2 接种后我的细胞有地方很挤形成一个个大集落，而有的地方没有细胞，分布很不均匀，是不是与重悬有关呢？
6 `/ ?* n; K$ c8 l0 E3 一般传代时重悬细胞吹打多少次比较好呢？
& b+ j) M5 ]/ |/ `& u希望大家谈谈自己的看法，谢谢。

luoziwei

吹打多少次？这个跟手法有关啊，一般要温柔的轻轻吹打，不能太猛了，否则有很多细胞团块的。我轻轻的吹，一般要20次左右。

zhuzhoujie24

请问楼主离心多少转每分钟？组织块能去干净不？

不苦的药

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1500转

wangzhiqi86

吹打次数并没有明确的界限，因为每个人的手法不一样，力度也不一样，只要保证对细胞没有很大伤害的情况下，吹匀就可以了。你说的克隆生长应该是指原代细胞，这是正常的，因为那么多的单核细胞里面才有一个MSC，当然只会在某个地方呈集落生长

飞翔的十字架

我个人认为不需要离心，因为我不觉得通过这一步的离心能纯化细胞；$ z: O; A9 z! h/ V5 w1 p/ a
我是用注射器针头进行吹打的，可以有效的去除碎骨等杂志，同时也不存在细胞团块

不苦的药

回复 飞翔的十字架 的帖子6 I" H" a- N5 U2 |8 z
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用注射器针头进行吹打为什么有效的去除碎骨等杂志？和用枪头吹打有啥区别

飞翔的十字架

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回复 不苦的药 的帖子
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% n( ]6 j" n1 m& P: v% v% B我一般用2ml或5ml的注射器，针头足够小，碎骨等杂志是吸不进去的，而且只有理论上能吹打成单细胞

SunYouLa

吹打的时候要轻慢，吹打要均匀，差不多15到20次吧# V  j$ Q2 Q$ I4 [( _
离心一般1000r/min 5min或者1200r/min 3min     
& V: i6 Y9 p+ ^, E0 F/ n4 B/ y* W! ]$ L接种的时候 一定要晃匀的哦！7 z* J% e5 R% `0 E6 W- i6 {

zhpeng07

你用什么吹，培养基？PBS?生理盐水？建议用培养基，基础培养基就可以。用注射器吹可以观察到骨的变化，吹几次后发白。原代的细胞一簇一簇是正常的，传代后要摇匀，放平，就回长满瓶底了。