关于人全长cDNA的获得

langziforever

我最近可能要做一个人基因（LRRK2）的表达，所以，我想问一下，大家是自己制备全长基因cDNA的吗？还是直接去公司购买的？我看了一下OriGene有卖，但是好贵啊，一个克隆质粒要2W多，有没有便宜些的公司卖？大家推荐一下啊，或者谁那有，能否友情赠送，我可以申请一下请你吃一个星期的饭，呵呵，多谢！

Yedan

取点细胞抽RNA反转cDNA自己P吧，国内很少有买现成的，不划算，自己做一个礼拜就做完了，吃一个礼拜的饭就省了吧...

langziforever

回复 Yedan 的帖子; P7 D% I/ b* h3 f0 H- J

6 G: [  C" ]  t( B# q# ?! T$ Z关键是全长的cDNA有7.5Kb，这么长一次反转录得到全长会不会很困难啊？

wangyashuai

全长cDNA不是说是一个载体中连全长cDNA，而是一个文库，包含许多载体，每个载体上会连一段cDNA，其中包含全部基因的拷贝。你只要建一个全基因组cDNA文库，然后从中间扩增你要的基因就行了。扩增全长cDNA主要是看mRNA两端的扩增能否实现，所以一些公司会在随机引物中加上寡聚的T，用以得到5‘的全长cDNA。

hndxws

我给你提供一个地方。厦门大学的韩家淮教授免费为大家提供人类的基因，只要他有的都会提供的，我已经要过好几个了，非常感谢他。这是个很好的科学家，不争名利，潜心研究，并为同行提供帮助，很让人钦佩啊。http://life.xmu.edu.cn/hancDNA/Query.aspx
4 f* r! e" N2 G( @" }索要基因时的要求是科研院所或大学的教育邮箱可以索要，商业邮箱不能索要。索要时有程序，按照网上提供的程序就可以了，免费的，邮费自付。我帮你查了，他有这个基因，你可以要得到。

Yedan

7.5kb是有点长的了，反转录肯定没问题，你找个高表达的细胞或者组织抽RNA吧，然后就硬着头皮P吧。GL

ndwzf

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* e* t# |7 @3 }  F  e0 `8 j' H/ K0 a! o) p; N  p. r
我想P的基因有9kb（不分段克隆），你有神魔好的酶和载体，能推荐一下魔？

langziforever

回复 wangyashuai 的帖子
8 k- q( }( |, P1 }6 [, a
* A: W0 p' F9 U8 h4 P  A4 q3 N因为我要做表达，肯定是需要一个基因的全长cDNA在同一个载体上！

langziforever

回复 ndwzf 的帖子
( k( B: H6 B4 q( a: o( h6 B  \! a& W+ S$ H$ I+ Y
好像很多公司都有那种高保真针对长片段的酶！

spchsq

hndxws 发表于 2011-12-6 18:00 , `" Z' ^8 e4 `
我给你提供一个地方。厦门大学的韩家淮教授免费为大家提供人类的基因，只要他有的都会提供的，我已经要过好 ...

, K3 b* D" e$ W3 W6 J向这位韩教授致敬，希望有更多这样的科学家