继续发帖，求帮助!小鼠msc不长的问题

zhuzhoujie24

10%四季青加DMEM/F12，细胞孔板里面有巨噬细胞，没有用离心纯化，细胞养了十几天都不长！求大家帮忙想想对策

meister

换血清

mason658616

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- I; q4 z# g0 v5 K: g# T* S9 S6 X$ H* [: E
能不能说的详细点，你是用的直接贴壁法？不长是指没细胞贴壁，越来越少，还是很多贴壁的没有变成长梭形的？

zhuzhoujie24

回复 mason658616 的帖子- S+ J* p" C3 F) H/ t
2 H+ j& P0 V* p9 t" N
万分感谢您百忙之中抽空回贴，我是直接将骨髓打到孔板里面贴壁的，不长不是说细胞贴壁变少，细胞没有死，但是生长极其缓慢，先是细胞为梭形的，长到后来（大约2周后）就展开了看不到明显的细胞形态。

zhuzhoujie24

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5 r5 Q! c* |& ^9 H0 D5 c7 d4 H9 V8 O4 o, j/ O
请问您用的是什么血清？

meister

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+ u1 }0 u0 M1 p- A4 O6 s1 C# LPAA的

mason658616

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& U' c$ `* ]4 T1 c' P
) A3 Y9 G' D( h5 g) Y: q全髓法一般3天左右细胞长出，一周传代，长两周还不传代确实是增殖缓慢。接种浓度也很重要，我做Ficoll法一般是10^5~10^6/ml，全髓法还要摸摸条件，细胞太少肯定不行，长不起来，血膜太厚又容易在洗的时候把贴壁的细胞带下来。血清我用的是Gibico的，3000左右。血清浓度10%。也有人原代用15%，传代后改为10%。血清浓度高了容易出现分化。骨髓的MSC个体差异较大，多做几次，别灰心

zhuzhoujie24

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5 u( U& f1 q* e# t1 b, t, i# ~感谢您对我的建议，但是您说的血清太贵了，我们实验室条件不允许。我正在努力想办法，祝您天天好心情！

weisong1015

这种条件我也遇到过，对于小鼠的骨髓间充质干细胞，它非常娇气，要用专门的培养基，从stem cell 购买的。要是还查不到的话，我可以把我买的货号发给你6 K+ J" B% M9 M* D3 k( G

yinjiqingqq

1. 使用国产血清养骨髓MSC不靠谱，我记得有文献做，成功率仅50%
# f- X2 s9 W* [+ D2.细胞密度是否太稀了