继续发帖，求帮助!小鼠msc不长的问题

zhuzhoujie24

10%四季青加DMEM/F12，细胞孔板里面有巨噬细胞，没有用离心纯化，细胞养了十几天都不长！求大家帮忙想想对策

meister

换血清

mason658616

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4 a6 ?9 c' e1 B% }2 b, i; |6 b0 X, i* c: f6 q) G
能不能说的详细点，你是用的直接贴壁法？不长是指没细胞贴壁，越来越少，还是很多贴壁的没有变成长梭形的？

zhuzhoujie24

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. H" h5 Y0 S) n3 B+ G  @, U万分感谢您百忙之中抽空回贴，我是直接将骨髓打到孔板里面贴壁的，不长不是说细胞贴壁变少，细胞没有死，但是生长极其缓慢，先是细胞为梭形的，长到后来（大约2周后）就展开了看不到明显的细胞形态。

zhuzhoujie24

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请问您用的是什么血清？

meister

回复 zhuzhoujie24 的帖子. {7 ]7 F4 f6 a) P' q

* I4 w! h0 _+ Z- a9 k/ A, ?PAA的

mason658616

回复 zhuzhoujie24 的帖子- _8 O+ L5 V- a. k9 Y6 |

4 o) F6 J* p3 o1 Z1 w* V全髓法一般3天左右细胞长出，一周传代，长两周还不传代确实是增殖缓慢。接种浓度也很重要，我做Ficoll法一般是10^5~10^6/ml，全髓法还要摸摸条件，细胞太少肯定不行，长不起来，血膜太厚又容易在洗的时候把贴壁的细胞带下来。血清我用的是Gibico的，3000左右。血清浓度10%。也有人原代用15%，传代后改为10%。血清浓度高了容易出现分化。骨髓的MSC个体差异较大，多做几次，别灰心

zhuzhoujie24

回复 mason658616 的帖子( L! |3 y2 D' N  w
2 G1 b$ }' y6 Z. \% ]! V" L- Z' X
感谢您对我的建议，但是您说的血清太贵了，我们实验室条件不允许。我正在努力想办法，祝您天天好心情！

weisong1015

这种条件我也遇到过，对于小鼠的骨髓间充质干细胞，它非常娇气，要用专门的培养基，从stem cell 购买的。要是还查不到的话，我可以把我买的货号发给你
4 U; J% G6 }% a0 C% U

yinjiqingqq

1. 使用国产血清养骨髓MSC不靠谱，我记得有文献做，成功率仅50%
, u5 r6 ]+ s4 c! `# Z% G2.细胞密度是否太稀了