成骨诱导11天后Alizarin Red staining，求鉴定

hxf_86

# c# g1 B# `* A5 n* K+ G1 B, @5 ?8 R; @2 a3 x5 E# b& {
这是我成骨诱导11天后的钙结节染色，大概流程如下
5 W2 J5 d4 a6 Y1 ?& l0 aPBS洗2遍，95%酒精固定10min，ddH2O洗3遍，然后0.1%Alizarin Red染色（做了个时间梯度，分别是5,15,30min），然后ddH2O洗3遍，拍照。下面是图片，求各位大侠鉴定~谢谢~
, Q( }% K3 y; L+ R9 T# N$ Q染色30min-1$ P1 U* [% K; V9 }9 \; J! Y; ~/ T
染色30min-2
. u) ?- x( ^! n5 v- l染色15min
1 A! l% c. v6 K3 H染色5min

wangzhiqi86

不清楚为什么要用双氧水处理呢？固定洗涤后，直接染色就好了啊

luoziwei

wangzhiqi86 发表于 2011-12-8 22:54
6 S2 D0 J+ O5 t5 h) Y不清楚为什么要用双氧水处理呢？固定洗涤后，直接染色就好了啊

. @" f% K! F' g. m0 l4 S# U' i0 V. K& m. [大哥，那是ddH2O，是双蒸水，不是双氧水

luoziwei

楼主是不是把茜素红染色液的pH调高了，偏碱性的染色就是不太正。不好说你的染色是不是钙结节，当然我也遇到过这种染色。从我的经验来说，如果ph控制在5以下的话，就有60%的可能性不是的。

wangzhiqi86

回复 luoziwei 的帖子. s. e8 M1 ^0 S% P" a9 |

7 j9 P3 F6 b3 O; N+ [' G! K! j3 |不好意思，看错了，我还纳闷，只有免疫组化里面才会用到双氧水啊。茜素红染色确实和染料的pH值有关

tjutiger

所用细胞是MSC么？11天就开始染色。。。

ljzmy82

MSC诱导分化吗，要是干细胞分化没有这么快的呀，得20天左右吧

细胞-77

回复 luoziwei 的帖子& Q& R0 o. E7 Q% `

; q7 [' T* P, u6 X6 k7 c$ W可否把你的茜素红试剂配制和染色步骤分享一下吗？谢谢

luoziwei

我已经在论坛里说了几次，都有详细步骤的，你可以查看看嘛

hxf_86

luoziwei 发表于 2011-12-9 10:03
- F% t8 t" ?/ u1 m- R楼主是不是把茜素红染色液的pH调高了，偏碱性的染色就是不太正。不好说你的染色是不是钙结节，当然我也遇到 ...

* f; e/ ]8 o( T
你好，谢谢你的回帖~我把PH调到8.3了。那请问你PH调到多少为合适呢？