plat-E细胞的转染试剂

zhangtang

我想问一下培养plat-E细胞进行抗性筛选的Blasticidn S and Puromycin，大家是买现成的呢还是自己配的呢？ 还有转染plat-E细胞进行转染时用哪种转染试剂比较好呢？Lip200,Fugene6还是LipLTX，希望得到大家的尽快回复哈，谢谢！

lchanlon

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4 C. O9 u& L4 O& @/ G$ _! H) g6 u6 g1 {) k0 `% \; [
plat-E is derived from 293T cells. I think calcium phoshpate method is great for this cell transfection.  This reagent is low cost. save much money for you PI. You can prepare by youself.  Many protocol descripe how to prepare the solution and transfect the 283T cells. Many are nature protocol.

echowdk

回复 2006sw0657 的帖子5 @3 Q* U+ O. v1 Y5 P# F
3 Q# I) g- |- [, ~! M
都是从sigma买的，有大小包装，大包装的不是很便宜（个人觉得）。

huangcong1988

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6 N# a5 t" K, k9 ^$ a
  r( w: R& C8 k7 P/ m: I想问一下，您的plat-e细胞是购自哪里？能否提供购买plat-e细胞公司的联系方式吗？非常感谢!

2006sw0657

回复 echowdk 的帖子( K9 @! b4 `( l% l- s4 s+ W
; Y+ |3 p/ I( h1 L" _. a
你好  请问Blasticidn S and Puromycin在哪买的 贵不？

huangcong1988

回复 zhangtang 的帖子$ p' g. `' k7 @$ l

$ }3 V: v" m- ?想问一下，您的plat-e细胞是购自哪里？能否提供购买plat-e细胞公司的联系方式吗？非常感谢!

不倒翁

lipo 和 Cacl2我们都常用 最常用的是氯化钙 自己配的 一般没有问题有 那两个药是自己买来配 1000X的 puro也可以配成5000X的 blasticidin 巨难用无比 处理后细胞状态极差 基本筛选不出来阳性克隆 puro用的比较多 但是这个药反应较慢 所以千万别等对照死光了再停药 死到一半停药 细胞会继续死

zhangtang

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  \: d- d* `  J' o5 a4 `( Z4 ?0 {9 g9 ^
好的，谢谢哈

zhangtang

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' \/ Y8 F( o" v+ D+ K3 S6 f
" P9 T6 M/ i# _好的，谢谢哈

Yedan

FuGENE，Roche已经停产了，如果刚开始做实验就别用FuGENE了，据说是Roche把生产线卖给了Promega，但是Promega巨坑无比，原本1ml/3000以内的FuGENE HD，Promega要卖5600，真的是要多黑有多黑啊。) J9 a; X9 [) V6 x$ M% u
Plat-E本身就是293T来的，比较好转染，Ca、Lipo2000、FuGENE HD（或者6）以及Roche新出的XtremeGENE HP，这些试剂我都用过转Plat-E，效率都很高（P.S.铺细胞的密度不太一样），具体怎么用看你们实验室的具体情况吧。