紧急请教一个关于转染细胞蛋白表达所需时间的问题！！谢谢！

webber43

请教各位大侠，在pMX载体上连接目的基因，用lipo2000转染293T细胞，什么时候能够在细胞内表达该蛋白啊？？我做的GFP阳性不到一天就有比较强的荧光了。问了师兄师姐，他们说这个跟蛋白大小有关，我的蛋白大小50KD左右，不知道1天的时间会不会有表达啊？？( A8 p+ b5 _* H
要外转了去做IF的，要是没有表达，我就悲剧了哦！！
. `2 T: z' v' I! G( O% l谢谢各位啊！！

webber43

回复 eley 的帖子% `. v6 o, s' t7 J9 F6 ]
: ^$ h$ V" t2 ?( ?8 `) t) ^
恩，非常感谢，期待阳性结果的出现呵呵

eley

这个1天就可以了，时间长了，蛋白量会积累，看你的目的了。
' w  j, h4 G* q9 h; N% ^! D如果是做IF我认为1天就足够了，如果要做WB可能要的蛋白量比较多，不过这样的话，2天也是足够足够。我以前的蛋白300K，2天就表的非常好了~~~

webber43

回复 gandanxiaoyang 的帖子4 F( g3 g# s% a, }: B
0 ~+ K, z7 g; \
也是，protocol上说的是转染48小时以后收细胞，估计48小时以后蛋白的增加就不显著了吧？

webber43

回复 zxcv12345 的帖子! I$ F- k3 Q; o5 E! \& l
) h9 r" P: D+ B
恩，非常感谢！那这样我就放心了，呵呵

webber43

回复 Yedan 的帖子
2 L  S7 t" X1 a. A/ X" U: F1 g! U
呵呵，因为实验室有现成的连有那个基因的载体，我就嫌麻烦，没有换其他载体直接转了。好像转染以后，蛋白小的表达快些，大的蛋白表达慢些吧，我也不知道为什么，希望有牛人指导啊！！

gandanxiaoyang

一般说来，24-48h后，蛋白表达就比较强了。24h后做免疫细胞荧光，应该没问题的！

zxcv12345

回复 webber43 的帖子
& d* s; L& q/ G9 f5 [! C1 L: R- N' R1 N! N0 ?
很正常，转细胞的话，6小时就可表达蛋白

Yedan

9 \/ t* W4 r; w+ Z

. a8 b: i$ c4 ]" ^& ~6 Q0 V2 DLZ我先说句题外话啊，为什么要用pMX做过表达呢?你把pMX转293还不如pcDNA之类的载体表达量来的高。还有，我不知道是不是我理解错误了，你想说的是用pMX包的retrovirus然后感染目的细胞，GFP 1天就亮了。那你对应的蛋白也应该表达了，我做的时候检测postinfection 48h 目的蛋白就已经overexpression了