紧急请教一个关于转染细胞蛋白表达所需时间的问题！！谢谢！

webber43

请教各位大侠，在pMX载体上连接目的基因，用lipo2000转染293T细胞，什么时候能够在细胞内表达该蛋白啊？？我做的GFP阳性不到一天就有比较强的荧光了。问了师兄师姐，他们说这个跟蛋白大小有关，我的蛋白大小50KD左右，不知道1天的时间会不会有表达啊？？
: [' M% `+ B% U: N# y5 f8 Q8 S要外转了去做IF的，要是没有表达，我就悲剧了哦！！
* T4 v( R, k$ z9 C谢谢各位啊！！

Yedan

; A  k7 {* ?1 i( |7 s5 I
/ M8 q1 [5 J$ ?$ y* `LZ我先说句题外话啊，为什么要用pMX做过表达呢?你把pMX转293还不如pcDNA之类的载体表达量来的高。还有，我不知道是不是我理解错误了，你想说的是用pMX包的retrovirus然后感染目的细胞，GFP 1天就亮了。那你对应的蛋白也应该表达了，我做的时候检测postinfection 48h 目的蛋白就已经overexpression了

zxcv12345

回复 webber43 的帖子6 d9 X$ n5 w/ W& v8 N/ P' A
( Q* j- t0 D! t+ P* l- `
很正常，转细胞的话，6小时就可表达蛋白

gandanxiaoyang

一般说来，24-48h后，蛋白表达就比较强了。24h后做免疫细胞荧光，应该没问题的！

webber43

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9 _* E) B" ~6 W/ @# o% C7 Z4 W+ J/ P& U" D
呵呵，因为实验室有现成的连有那个基因的载体，我就嫌麻烦，没有换其他载体直接转了。好像转染以后，蛋白小的表达快些，大的蛋白表达慢些吧，我也不知道为什么，希望有牛人指导啊！！

webber43

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1 g/ \  S, h  m3 o* O3 _; W
2 {; X4 A5 T, D& K* M& i, w5 t恩，非常感谢！那这样我就放心了，呵呵

webber43

回复 gandanxiaoyang 的帖子, b4 E: F- K. Y! D& V
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也是，protocol上说的是转染48小时以后收细胞，估计48小时以后蛋白的增加就不显著了吧？

eley

这个1天就可以了，时间长了，蛋白量会积累，看你的目的了。; l* B& [5 v( b$ y0 H# J
如果是做IF我认为1天就足够了，如果要做WB可能要的蛋白量比较多，不过这样的话，2天也是足够足够。我以前的蛋白300K，2天就表的非常好了~~~

webber43

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恩，非常感谢，期待阳性结果的出现呵呵