转染-筛选-病毒

sizhengliu

今天想到一个问题，我们一般制备病毒是“质粒转染-收毒-丢弃包装细胞”，可不可以在质粒转染后，筛选稳定的细胞，来持续合成和收集病毒呢？

gaofei0515

回复 Yedan 的帖子
7 B' y* |9 r. T1 n- m9 v+ p* T8 N+ u
+ o) U4 [7 ]* w. w前辈，请问你有Plat-E细胞么？能分我一点吗？付费也可以，实验没进展，希望您能帮助我

sizhengliu

回复 ying 的帖子
& K1 U0 r2 x) x* N/ B3 V7 S
( f: t! d4 S/ B+ D! K: z& E( x0 Z这种重组的病毒是不能通过感染再复制的。不过欢迎讨论！

ying

如果你在朝鲜的话，可以这样：做成真正的AIDS病毒，每次传代补一些细胞进去给它当粮食～  其实不知道是不是可以这样：把一个或若干个元件做成需要特殊的转录因子才能表达的，而只有包装细胞里才组成型表达那个转录因子（类似于293T里的那个T抗原），这样的话，只有这种细胞才能当这个病毒的包装细胞。所以即使感染到别的细胞里，由于缺少这个转录因子的表达，所以病毒不会复制。然后你每一次传代就补充一些这种细胞给它当食物～（别试啊，我觉得会有很大潜在危险，不可预知因素太多，仅供理论讨论）

sizhengliu

回复 张也行 的帖子
, `6 [: h1 Q, Z8 ]& g2 ^+ y# r( W% K7 M7 [, L2 t* s6 M
多谢指教！

张也行

LZ提出这种想法可能也是觉得几个质粒共转染的方法有些麻烦吧。但是只所以这么做也是从安全的角度着想。以前的病毒生产方法确实很简单，但是却有包装出野生型病毒的可能，还是安全第一吧。

sizhengliu

回复 huangcong1988 的帖子
, k  c2 W8 M. {1 ^1 Q9 R" `# B. N0 k2 |
明白了，谢谢！

huangcong1988

如果细胞不破裂，慢病毒没法释放的，你再好好看看慢病毒包装的整个过程吧。质粒转染293T细胞以后，在293T细胞中形成构成病毒的RNA和蛋白外壳，然后宿主细胞（293T）裂解，释放慢病毒，然后我们才能收集病毒上清，所以说，经质粒转染收集病毒以后，细胞就已经裂解死亡，剩下的细胞，除非你这次收集病毒滴度很低，要么就是包毒能力差的细胞，所以转染后筛选收集细胞没用的

Yedan

回复 sizhengliu 的帖子5 L6 [, @1 B7 i0 _& a, d4 C; P4 G

4 Z: X# Y) |! F- F$ vLenti的我爱用293T包，LZ你的想法其实是很好的，因为每次转染3质粒太麻烦了。但是有个问题你考虑过么，每次包完毒的细胞都已经confluent，甚至都已经融合了，这样的细胞是没法继续要下去的.Plat包装系统其实就是符合你说的筛选稳定的细胞，可惜是retro的。

sizhengliu

回复 bigchock 的帖子8 T- ~( }& Z! j2 p  X' [$ `. Q8 N- F
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慢病毒是收集上清液的，需要细胞裂解么？