几个关于全骨髓法培养MSC的细节问题

sothiskk

初次培养msc，问题比较山寨还请大家见谅。1 y  p; D% r( J
个人用2%FBS的PBS冲洗髓腔，离心后培养基重悬。几个小问题：, Q" v0 h  i% D# m% O8 y! X4 [% i
1、冲洗髓腔时过滤掉大的团块是必要的吗，大家都过滤吗？因为我听某前辈的没有过滤，结果类似MSC形态的细胞还真都出现在贴壁的团块周围（大约72h）。
/ g( @0 d& X1 W( M5 b. h2、大概和没有过滤有关，首次换液之前培养液中杂质比较多，比较混，按照以前养其他细胞的经验应该是污染了，于是就扔了。可连续两次都是这样，就硬着头皮给换了液，又过了几天生长情况还可以，也没有污染的迹象，这正常吗，各位首次换液之前的培养液是清亮的吗？
3 ?# S! D/ B6 c8 u, D! a3、72h第二次换液之后，还是有不少贴壁的圆形细胞，形态看起来应该是红细胞，看到别人很多图片上完全看不到贴壁的圆形细胞，请问那是多长时间以后的事儿了？

漫游天龙八部

我是通过兔抽取骨髓培养的，抽取时在注射器内加入肝素钠，原代培养是间充质干细胞也是从细胞团周围开始生长，培养液也浑浊，但传代后细胞形态典型，而且生长很快。

漂泊的风

回复 sothiskk 的帖子9 C% p( y' S5 X. Z

4 L. a4 \4 C' V9 g养骨髓间充质干细胞在前两次换液是比较浑浊，但是一般情况下不是污染，到第三次换液就清澈了；至于大的组织块我们都没有去除，细胞长得也挺好的；有杂细胞也是很正常的，毕竟在骨髓里间充质干细胞站的份额是很少的，经过传代可以使干细胞进行纯化，一般到第二代就可以达到纯化的间充质干细胞了。

sothiskk

回复 luoziwei 的帖子
' Y6 x  E* V6 z' Z0 N- R
9 K+ N. _9 N# A同意。

luoziwei

回复 sothiskk 的帖子5 t& G/ V! d9 _) i; o. N
/ v: Q; I5 x8 Y
我没过滤，24h就换液，能贴壁的才是好细胞，rapid-selfrenew细胞，呵呵。

sothiskk

回复 细胞海洋 的帖子3 |) f4 t9 s" I; O6 m
6 ?6 ^5 k. A  t+ y5 _  A$ q
谢谢，现在已经正常了.

细胞海洋

回复 sothiskk 的帖子
* [4 B% A4 B! j6 x, ^0 S8 n" n0 Z; S# X# f7 x, C
呵呵 那我误会了 抱歉 你换一个浏览器登陆论坛吧 有些浏览器不是很支持 火狐？

sothiskk

回复 spchsq 的帖子
# c" S+ |2 o/ G  ]% U0 o+ \$ `$ y( M, \6 v% A1 E. l+ z
多谢指教...

sothiskk

回复 细胞海洋 的帖子
% z8 O' ?5 {3 @- ~. ~- w
# K& ]& }. _! l" ?6 {" D" m' @谢谢，这个...您把我想的也太山寨了，我是当时点了几次都让我重新登录才无奈为之...

spchsq

1.觉得骨髓中白色团块是骨髓小粒，是造血细胞生长中心，干细胞应该在骨髓小粒中，是不能过滤的，如果是凝块应为红色且有纤维聚集应该是血液凝固了，很好区分的。
' K. A& |: H* A- X5 [$ p2.做动物实验，因为己处死动物，所以防止凝固应该缩短离体时间，凝固也是发生在这段时间，如果采用培养液冲洗骨髓腔，此时骨髓已稀释不会凝固了，不需要再加抗凝剂了。如从人身上取骨髓则在采集骨髓时加入抗凝剂。