几个关于全骨髓法培养MSC的细节问题

sothiskk

初次培养msc，问题比较山寨还请大家见谅。
: B% a9 ^& g0 y" G* q& F0 a  l2 z+ ?个人用2%FBS的PBS冲洗髓腔，离心后培养基重悬。几个小问题：3 p. H1 ~" n. [9 B$ Q8 u# L
1、冲洗髓腔时过滤掉大的团块是必要的吗，大家都过滤吗？因为我听某前辈的没有过滤，结果类似MSC形态的细胞还真都出现在贴壁的团块周围（大约72h）。1 I7 F% m! Z* |* k  x" x, L
2、大概和没有过滤有关，首次换液之前培养液中杂质比较多，比较混，按照以前养其他细胞的经验应该是污染了，于是就扔了。可连续两次都是这样，就硬着头皮给换了液，又过了几天生长情况还可以，也没有污染的迹象，这正常吗，各位首次换液之前的培养液是清亮的吗？* r/ M, q9 B" C' y
3、72h第二次换液之后，还是有不少贴壁的圆形细胞，形态看起来应该是红细胞，看到别人很多图片上完全看不到贴壁的圆形细胞，请问那是多长时间以后的事儿了？

signext

问题不山寨，很实在
+ ~3 x: E$ V  g$ t1.过滤 大的组织块还是要去除的
) E2 A) O! Q- g* c4 `7 D% O$ e' Z2 首换液前杂细胞多 死细胞也多 是比较浑 没事的
! L0 U  s, \: E  Q3 好的话传代后吧

zarecol

从你的步骤来看，你养的MSC是动物源的吧？用的是全骨髓培养法吧？
2 b3 ^* U* I4 r首先，全骨髓原代培养的话杂细胞是比较多的，而且加上大量的血细胞，接种后发现培养液不澄清是正常的，但也不会像染菌那样，因为毕竟PH不会有太大的变化，如果你所用的培养液中加入了指示剂的话，你会发现培养液浑浊，但是颜色基本没变化。而且井下观察培养液依然澄清，只是有大量的悬浮细胞，首次换液后就会变回澄清了。
9 V# ?+ r- J& F' J其次，你所描述的大的团块是不是血栓呢？如果是的话，你可以考虑把你所用的PBS和培养液做抗凝处理，不过，即使不处理影响不是很大。细胞依然可以生长。但过多的血细胞会消耗培养基中的营养成分，所以，要及时换液。# Q  h" ^) k7 x( I" E( O
再次，贴壁的圆形细胞是正常的，是骨髓中的杂细胞，随着培养的换液和传代会慢慢消除不必担心。4 B2 H$ i. J! T  Z# [
个人观点，仅供参考。希望对你有所帮助！

yyyan126

全骨髓培养法是这样的，第二天会变得比较黄比较浑浊的，但不是污染，是正常的，通过换液就可以了。

sothiskk

感谢各位的热心帮助，原来大家都是早上出来活动...

sothiskk

回复zarecol : 谢谢，是大鼠。大团块有可能是血栓，但是在冲骨髓之前就已经就形成了的，可能和我操作不太熟练，离体时间比较长有关。不知道您说的抗凝处理指什么，但我觉得这种情况加肝素应该没什么用吧。

细胞海洋

回复 sothiskk 的帖子# S9 B& H2 ^/ K. Z2 y7 g
( L& P  a, n" R' s3 T
回复谁的帖子，就点击他回帖中的回复按钮，像我这样，你这样回复他看不到提醒的

zarecol

回复 sothiskk 的帖子
; d: I! a; }, u9 {" Z. O2 V( @
! u1 y' Y& [& I4 f8 h5 k# P如果已经形成的话加肝素就没用了，不过如果你取完骨髓有操作时间比较长的话，可以考虑加一点进你的PBS和培养液中，对细胞培养没什么影响的。

spchsq

1.觉得骨髓中白色团块是骨髓小粒，是造血细胞生长中心，干细胞应该在骨髓小粒中，是不能过滤的，如果是凝块应为红色且有纤维聚集应该是血液凝固了，很好区分的。
  X; {2 r% s& O3 h2.做动物实验，因为己处死动物，所以防止凝固应该缩短离体时间，凝固也是发生在这段时间，如果采用培养液冲洗骨髓腔，此时骨髓已稀释不会凝固了，不需要再加抗凝剂了。如从人身上取骨髓则在采集骨髓时加入抗凝剂。

sothiskk

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: A( q' e; d3 e( }9 C: i+ j1 v5 V
/ O! x* L6 x/ z9 B( Z! h谢谢，这个...您把我想的也太山寨了，我是当时点了几次都让我重新登录才无奈为之...