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几个关于全骨髓法培养MSC的细节问题   [复制链接]

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楼主
发表于 2012-1-8 12:41 |只看该作者 |正序浏览 |打印
初次培养msc,问题比较山寨还请大家见谅。
7 Q; t. L9 I+ i个人用2%FBS的PBS冲洗髓腔,离心后培养基重悬。几个小问题:
5 ~3 o" _0 E9 C1、冲洗髓腔时过滤掉大的团块是必要的吗,大家都过滤吗?因为我听某前辈的没有过滤,结果类似MSC形态的细胞还真都出现在贴壁的团块周围(大约72h)。  f* ~8 |" }6 B' U
2、大概和没有过滤有关,首次换液之前培养液中杂质比较多,比较混,按照以前养其他细胞的经验应该是污染了,于是就扔了。可连续两次都是这样,就硬着头皮给换了液,又过了几天生长情况还可以,也没有污染的迹象,这正常吗,各位首次换液之前的培养液是清亮的吗?
' P: L/ G7 v; ?7 G- m3、72h第二次换液之后,还是有不少贴壁的圆形细胞,形态看起来应该是红细胞,看到别人很多图片上完全看不到贴壁的圆形细胞,请问那是多长时间以后的事儿了?
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发表于 2012-2-4 20:41 |只看该作者
我是通过兔抽取骨髓培养的,抽取时在注射器内加入肝素钠,原代培养是间充质干细胞也是从细胞团周围开始生长,培养液也浑浊,但传代后细胞形态典型,而且生长很快。
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发表于 2012-1-19 08:45 |只看该作者
回复 sothiskk 的帖子
( ]: J( X* j3 a! T! V9 \: w
8 X  e+ n! G# A- q) M% A2 Y养骨髓间充质干细胞在前两次换液是比较浑浊,但是一般情况下不是污染,到第三次换液就清澈了;至于大的组织块我们都没有去除,细胞长得也挺好的;有杂细胞也是很正常的,毕竟在骨髓里间充质干细胞站的份额是很少的,经过传代可以使干细胞进行纯化,一般到第二代就可以达到纯化的间充质干细胞了。
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发表于 2012-1-15 08:25 |只看该作者
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回复 luoziwei 的帖子, a8 n& u( l% M2 z. A% U

$ p$ q/ B9 N  N; h1 k* d; b同意。

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优秀会员 金话筒

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发表于 2012-1-11 10:08 |只看该作者
回复 sothiskk 的帖子
3 u7 p5 O9 s( ^  e0 z+ _0 M: i
" ^+ a+ w2 L% i! o% O我没过滤,24h就换液,能贴壁的才是好细胞,rapid-selfrenew细胞,呵呵。
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发表于 2012-1-10 19:30 |只看该作者
回复 细胞海洋 的帖子, q, W; H" y5 M, W

- r; s4 [+ j/ i; o6 y1 I谢谢,现在已经正常了.

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小小研究员

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发表于 2012-1-10 18:25 |只看该作者
回复 sothiskk 的帖子9 n: P1 d$ @3 w+ D6 D7 R7 K

+ e- Z' Z3 B0 g呵呵 那我误会了 抱歉 你换一个浏览器登陆论坛吧 有些浏览器不是很支持 火狐?

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发表于 2012-1-10 18:20 |只看该作者
回复 spchsq 的帖子
( f& L7 ?# G( B. E! H8 Z9 d8 D, v* L0 E
多谢指教...

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发表于 2012-1-10 18:17 |只看该作者
回复 细胞海洋 的帖子* C; G% y6 z3 x3 r9 E

$ O2 `6 ~; h9 H* R( P; Y谢谢,这个...您把我想的也太山寨了,我是当时点了几次都让我重新登录才无奈为之...

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发表于 2012-1-10 11:17 |只看该作者
1.觉得骨髓中白色团块是骨髓小粒,是造血细胞生长中心,干细胞应该在骨髓小粒中,是不能过滤的,如果是凝块应为红色且有纤维聚集应该是血液凝固了,很好区分的。
* d& V; m1 Q* y; ~9 g7 R2.做动物实验,因为己处死动物,所以防止凝固应该缩短离体时间,凝固也是发生在这段时间,如果采用培养液冲洗骨髓腔,此时骨髓已稀释不会凝固了,不需要再加抗凝剂了。如从人身上取骨髓则在采集骨髓时加入抗凝剂。
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