几个关于全骨髓法培养MSC的细节问题

sothiskk

初次培养msc，问题比较山寨还请大家见谅。
3 ~: S/ P4 {  Z" x/ e个人用2%FBS的PBS冲洗髓腔，离心后培养基重悬。几个小问题：" @% h5 `3 T: K7 J* f
1、冲洗髓腔时过滤掉大的团块是必要的吗，大家都过滤吗？因为我听某前辈的没有过滤，结果类似MSC形态的细胞还真都出现在贴壁的团块周围（大约72h）。
. ^, f' f, I- M' V2、大概和没有过滤有关，首次换液之前培养液中杂质比较多，比较混，按照以前养其他细胞的经验应该是污染了，于是就扔了。可连续两次都是这样，就硬着头皮给换了液，又过了几天生长情况还可以，也没有污染的迹象，这正常吗，各位首次换液之前的培养液是清亮的吗？8 Y, y: w: |6 R
3、72h第二次换液之后，还是有不少贴壁的圆形细胞，形态看起来应该是红细胞，看到别人很多图片上完全看不到贴壁的圆形细胞，请问那是多长时间以后的事儿了？

漫游天龙八部

我是通过兔抽取骨髓培养的，抽取时在注射器内加入肝素钠，原代培养是间充质干细胞也是从细胞团周围开始生长，培养液也浑浊，但传代后细胞形态典型，而且生长很快。

漂泊的风

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  i, c$ ~4 h& _3 w+ k8 @7 Y7 N0 Q$ o. J* P0 I" R
养骨髓间充质干细胞在前两次换液是比较浑浊，但是一般情况下不是污染，到第三次换液就清澈了；至于大的组织块我们都没有去除，细胞长得也挺好的；有杂细胞也是很正常的，毕竟在骨髓里间充质干细胞站的份额是很少的，经过传代可以使干细胞进行纯化，一般到第二代就可以达到纯化的间充质干细胞了。

sothiskk

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; ^/ X1 H+ \9 W3 n* O7 L6 b8 z2 I( R* p# p. j- a, v" x5 j
同意。

luoziwei

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3 {! \" S' T+ g. |# t3 G
' F4 d9 [: e4 W! \  k/ ]6 A3 p: f2 a我没过滤，24h就换液，能贴壁的才是好细胞，rapid-selfrenew细胞，呵呵。

sothiskk

回复 细胞海洋 的帖子6 \3 K5 m! W% ]9 b& j# s: y

& @+ e1 G, [+ g9 |# ^+ e' U谢谢，现在已经正常了.

细胞海洋

回复 sothiskk 的帖子: ?, o' e& P8 U5 F5 z% `

2 _! h$ s/ J6 `1 ]: H( v呵呵 那我误会了 抱歉 你换一个浏览器登陆论坛吧 有些浏览器不是很支持 火狐？

sothiskk

回复 spchsq 的帖子
# P. S, @7 X$ A; B! R' F; @, A# {8 h4 {% P
多谢指教...

sothiskk

回复 细胞海洋 的帖子* M' Q" |8 r% B- l$ l" S

4 Y/ k7 q. l' s- F" o3 _谢谢，这个...您把我想的也太山寨了，我是当时点了几次都让我重新登录才无奈为之...

spchsq

1.觉得骨髓中白色团块是骨髓小粒，是造血细胞生长中心，干细胞应该在骨髓小粒中，是不能过滤的，如果是凝块应为红色且有纤维聚集应该是血液凝固了，很好区分的。$ |- @- g0 Y$ Y4 S# s9 r6 ?1 a
2.做动物实验，因为己处死动物，所以防止凝固应该缩短离体时间，凝固也是发生在这段时间，如果采用培养液冲洗骨髓腔，此时骨髓已稀释不会凝固了，不需要再加抗凝剂了。如从人身上取骨髓则在采集骨髓时加入抗凝剂。