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几个关于全骨髓法培养MSC的细节问题   [复制链接]

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楼主
发表于 2012-1-8 12:41 |只看该作者 |正序浏览 |打印
初次培养msc,问题比较山寨还请大家见谅。
3 ~: S/ P4 {  Z" x/ e个人用2%FBS的PBS冲洗髓腔,离心后培养基重悬。几个小问题:" @% h5 `3 T: K7 J* f
1、冲洗髓腔时过滤掉大的团块是必要的吗,大家都过滤吗?因为我听某前辈的没有过滤,结果类似MSC形态的细胞还真都出现在贴壁的团块周围(大约72h)。
. ^, f' f, I- M' V2、大概和没有过滤有关,首次换液之前培养液中杂质比较多,比较混,按照以前养其他细胞的经验应该是污染了,于是就扔了。可连续两次都是这样,就硬着头皮给换了液,又过了几天生长情况还可以,也没有污染的迹象,这正常吗,各位首次换液之前的培养液是清亮的吗?8 Y, y: w: |6 R
3、72h第二次换液之后,还是有不少贴壁的圆形细胞,形态看起来应该是红细胞,看到别人很多图片上完全看不到贴壁的圆形细胞,请问那是多长时间以后的事儿了?
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发表于 2012-2-4 20:41 |只看该作者
我是通过兔抽取骨髓培养的,抽取时在注射器内加入肝素钠,原代培养是间充质干细胞也是从细胞团周围开始生长,培养液也浑浊,但传代后细胞形态典型,而且生长很快。
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发表于 2012-1-19 08:45 |只看该作者
回复 sothiskk 的帖子
  i, c$ ~4 h& _3 w+ k8 @7 Y7 N0 Q$ o. J* P0 I" R
养骨髓间充质干细胞在前两次换液是比较浑浊,但是一般情况下不是污染,到第三次换液就清澈了;至于大的组织块我们都没有去除,细胞长得也挺好的;有杂细胞也是很正常的,毕竟在骨髓里间充质干细胞站的份额是很少的,经过传代可以使干细胞进行纯化,一般到第二代就可以达到纯化的间充质干细胞了。
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发表于 2012-1-15 08:25 |只看该作者
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回复 luoziwei 的帖子
; ^/ X1 H+ \9 W3 n* O7 L6 b8 z2 I( R* p# p. j- a, v" x5 j
同意。

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发表于 2012-1-11 10:08 |只看该作者
回复 sothiskk 的帖子
3 {! \" S' T+ g. |# t3 G
' F4 d9 [: e4 W! \  k/ ]6 A3 p: f2 a我没过滤,24h就换液,能贴壁的才是好细胞,rapid-selfrenew细胞,呵呵。
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发表于 2012-1-10 19:30 |只看该作者
回复 细胞海洋 的帖子6 \3 K5 m! W% ]9 b& j# s: y

& @+ e1 G, [+ g9 |# ^+ e' U谢谢,现在已经正常了.

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小小研究员

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发表于 2012-1-10 18:25 |只看该作者
回复 sothiskk 的帖子: ?, o' e& P8 U5 F5 z% `

2 _! h$ s/ J6 `1 ]: H( v呵呵 那我误会了 抱歉 你换一个浏览器登陆论坛吧 有些浏览器不是很支持 火狐?

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发表于 2012-1-10 18:20 |只看该作者
回复 spchsq 的帖子
# P. S, @7 X$ A; B! R' F; @, A# {8 h4 {% P
多谢指教...

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发表于 2012-1-10 18:17 |只看该作者
回复 细胞海洋 的帖子* M' Q" |8 r% B- l$ l" S

4 Y/ k7 q. l' s- F" o3 _谢谢,这个...您把我想的也太山寨了,我是当时点了几次都让我重新登录才无奈为之...

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发表于 2012-1-10 11:17 |只看该作者
1.觉得骨髓中白色团块是骨髓小粒,是造血细胞生长中心,干细胞应该在骨髓小粒中,是不能过滤的,如果是凝块应为红色且有纤维聚集应该是血液凝固了,很好区分的。$ |- @- g0 Y$ Y4 S# s9 r6 ?1 a
2.做动物实验,因为己处死动物,所以防止凝固应该缩短离体时间,凝固也是发生在这段时间,如果采用培养液冲洗骨髓腔,此时骨髓已稀释不会凝固了,不需要再加抗凝剂了。如从人身上取骨髓则在采集骨髓时加入抗凝剂。
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