求油红O原液配制详细方法

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1.染色液的配制:
2 G4 x& Z& }( V( }材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸
6 @/ G% ]9 c5 m4 L& R称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。+ x) [7 H3 @2 N/ X  M
2.10%中性甲醛的配制
5 e2 {) X) n0 w  F5 H材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶
$ Y3 y; d  c: K# t- V$ f9 K0 B9 g称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。, c- H6 y/ d: B! S$ W& @' |
3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。
& O: w! t3 R9 c. t2 A8 W+ k" K4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。; l8 q* }# N. g; M/ T! S
5.染色步骤： 1 P' b8 n- _, g3 \; _% q
5.1 先小心轻缓倒去培养夜。
3 r7 a4 V8 H  I, O. G5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。
; S- Y# d9 {- B2 T- Y5.3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。固定的是细胞膜。
& k# w( j2 t% `) ]5.4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。0 J. W" O) r, b" T& J
5.5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
; f* B( j8 D. \: K* n5.6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
1 K2 J& P0 J# j6 q; o5.7 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。# l# y& c- {6 i% N0 s
5.8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。
7 B- C) j6 s3 f9 R+ L5.9 显微镜观察。