求油红O原液配制详细方法

冰枫de梦

    我是将油红O溶于异丙醇中，但有时溶解不充分有少许沉淀，求解。

zerollx

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4 b1 W7 y0 T5 t0 ^溶解不了是正常的，稍微颠倒混匀个5~10min，再沉淀一会，直接取上清过滤待用就可以了

tjbone

1.染色液的配制:! b7 Q4 [; y7 K+ |5 X! ^; J" T
材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸
! v  x$ Z4 h8 h! X3 n称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。
# \. v% C% ?2 `0 N( @, U2.10%中性甲醛的配制
: M) p& v; _# h6 f: F材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶  z0 l/ N6 R& B( i' a7 q
称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。
$ q: K! o9 j0 }; _+ e0 t3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。
9 `$ u1 Y9 S6 h3 L) S* ?- v4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。$ h  k2 C# o% @, j7 E7 f' j; n
5.染色步骤：
5 Q9 r4 R  W+ B9 n( \5.1 先小心轻缓倒去培养夜。4 U' N$ z7 v1 N% u+ R2 q
5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。
% W# @  R8 z/ C2 |. m# Q6 g) u5.3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。固定的是细胞膜。$ I$ F; r' A9 ~
5.4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。3 E& \' b) @! a4 V) W, p2 M
5.5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。% j! j. _/ y: V3 o
5.6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
% Y3 `3 ~) R" r5.7 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
* J% y. S. C5 y' j1 r+ K5.8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。
+ ]/ T! l( o, _5.9 显微镜观察。

mansnoopy

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; d' I7 n6 h5 l* j! Y! \: D/ R# F/ Q7 p
你溶完后需要过滤的，千万不能直接用！

冰枫de梦

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& i9 T/ H3 ^" u
谢谢  呵呵

hhxxattxs123

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$ Z+ `& P4 S. j6 H8 b1 i7 m1 Z. O0 {' p1 K
过滤的时候，用什么标准的滤器啊？

天枰2012

回复 hhxxattxs123 的帖子; n4 J* |- p1 H! K2 Z

1 U4 K. x" n* F% S! O用滤纸