求油红O原液配制详细方法

冰枫de梦

    我是将油红O溶于异丙醇中，但有时溶解不充分有少许沉淀，求解。

zerollx

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" C6 g7 K1 l- T% J4 t6 d3 ?5 K
% X- @7 c1 ]3 D溶解不了是正常的，稍微颠倒混匀个5~10min，再沉淀一会，直接取上清过滤待用就可以了

tjbone

1.染色液的配制:- Q, L- F2 q$ H* d- F, y9 _
材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸
! x/ K6 x5 ^7 ]- m' U- M6 v+ k称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。) y1 C* d/ d3 ?8 j* z0 J3 s
2.10%中性甲醛的配制
- }( b8 q3 G" n' j材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶
9 R6 J- {. G$ e2 m称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。
/ ?+ z$ z+ {  d8 z- ~" {* ^4 G4 T3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。, T4 W# [2 \/ {) ^5 G* P
4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。
! a* r0 m6 j# j' {5.染色步骤：
/ M& ?  O& U' G$ z# N1 s9 X5.1 先小心轻缓倒去培养夜。/ P% v" ]2 m% @1 R, Y, ]5 [# k
5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。
- ~7 X' W5 _9 p; G+ `" t5.3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。固定的是细胞膜。
: D9 H* G4 |8 h" R! G2 L5.4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。
1 \( O  F9 a- b* U5.5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
2 y: n' y8 R4 ]5.6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。4 r7 `* ]9 X1 t2 f: \1 L3 D1 ^
5.7 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。4 c, U8 g* B% u( T; J+ R% A2 i
5.8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。# R# R; r( q: Y1 _6 ]5 ?3 Z
5.9 显微镜观察。

mansnoopy

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$ @3 `3 d) l& a( w+ i" z9 w- T8 ~( ^- a( V& E
你溶完后需要过滤的，千万不能直接用！

冰枫de梦

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" s0 x) r( Z# ?0 t5 h
& o$ ?$ K: l3 O% l# }1 c3 @4 q' {$ T谢谢  呵呵

hhxxattxs123

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; D1 L% G( k" p6 s8 K7 W7 o# `/ z& K8 N' x" m, [6 W# ~
过滤的时候，用什么标准的滤器啊？

天枰2012

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3 L+ i+ W1 m3 v2 U0 L
* h2 a- N( `* O用滤纸