RNA提取出现双峰问题

goodboy

最近从血液中提取RNA出现双峰，不知道怎么解释？浓度大约3000ng/ul，A260/A280为2.02.还有影响后续实验不？貌似从血液中提取的RNA浓度普遍偏高，是不是测得不准啊？还是血液里面有杂质影响了浓度的测定

cronos0910

双峰是指？
* [4 d8 B* `. h& Y% G0 T# s6 F在为230nm？* n. ^# U0 a/ K5 b
我推测你可能是因为离子没洗干净
. \0 z* c  E* _0 J2 {8 t因为你的260/280很高，不会是蛋白质污染
/ H( g0 A$ Y8 k' n" W$ w酒精那步骤在多做一次

weiyepan

230吸收峰不一定是离子的，一般的无机离子不会再紫外有吸收的。还原性糖类也有可能的

kongpzh

血液中细胞数本来就不少，所以提的浓度高也正常。不知道你的双峰分别是指哪个波段？如果是230，可以多洗几次盐。我们实验室提RNA都洗三次盐呢。

goodboy

回复 cronos0910 的帖子! v, X3 r% l8 V4 [# a/ f6 f7 o
* S* K2 L1 X3 y# s( k; E0 t: N
谢谢，之前看到论坛里也有说是因为离子的问题。电泳结果到是还可以

goodboy

回复 weiyepan 的帖子3 D4 S8 A3 `+ Z+ R$ D; O1 ^

% }' Y& c1 S4 s- \% h0 f那还原性糖类应该怎么去除呢？

goodboy

回复 kongpzh 的帖子
  i6 [: n  J3 \+ h; |; N3 T" O/ D
; m) u( |, N! U9 t之前提取组织、细胞的RNA只洗一次也都未出现过双峰，这次提的是自己血液中的RNA，所以不知道是不是因为是人的缘故

scienese

跑电泳看看  条带正确就没有问题
  k6 Y4 q' q) d' T2 r; {* B还可以做定量 做无模板阴性对照和RNA为模板阴性对照

xbqian

靠波长检测出来的结果很多时候不是太可靠，我个人的经验是进行电泳检测，同时可以取少量RNA用可靠的看家基因引物进行预实验。实在不行时可进行酒精纯化，当然会损失部分RNA。

goodboy

回复 scienese 的帖子
* r- K7 _4 r' S$ n# _: W1 z) ^: {
0 y0 \* F. e4 n/ |! Y" s跑电泳是没有问题的，RNA是年前提取的，今天再看一下反转录一下