对于贴壁较牢的细胞传代时如何消化？

759512199

有些细胞贴壁很牢，用胰酶短时间消不下来，消化时间长了细胞就死了。请教各位大虾怎么消化？

zzc2211

PBS充分清洗，去除血清成分，0.05-0.1%胰酶加入后，先干点别的，等上15min后，再观察，终止，如MDCK。也可用胰酶原液，但要注意观察，消化下来后迅速终止，作用时间长细胞就完了。

759512199

回复 zzc2211 的帖子
0 ?( f- _: t2 y1 a. A3 }; O" N
' T% d  }. m8 b! D  X8 o胰酶试过了，搞不定啊，要不消不下来，消下来就死啊！

aulenuyah

要不试试胶原酶？这个不怕时间久- m5 T' `# ]& p0 O: k

rongrong

可以不用PBS洗用胰酶润洗下，吸掉，然后再加适量的胰酶（0.5-1ml）37度消化，应该 没问题，我们实验室就是这样搞定的；还有一种方法就是配置一种胰酶，提高ETDA-Na2的量，这个的话就用pbs洗然后再消化，希望对你有帮助

新疆八钢

回复 759512199 的帖子2 o2 o  T, `4 [9 o/ j7 T' H5 G2 m+ I
1 g# K( @. H8 l, A
同意楼上意见，直接用半量胰酶预洗下，吸掉，然后再加适量的胰酶（0.5-1ml）37度消化，应该 没问题

houbara

用胰酶处理后，再用cell scraper.

细胞-77

我也遇到过这种情况，胰酶消化时，细胞不变圆，但可以从培养皿表面脱离。不知道是什么原因。

sirius_zou

1.胰酶37度消化，隔一段时间拿出来晃动一下并镜检: Q/ P$ K1 @* P" Y5 j0 h) l
2.细胞变圆后用FBS终止消化
! D1 b, ~' g. H  f3 o# r* \+ X3.用细胞刮刀轻轻将细胞刮下并转移至离心管中
! \0 ?& b7 [4 N' i* ]! E! p4.培养皿/瓶加少许PBS，镜检观察有无细胞，再用刮刀刮下。
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9 k. m& i, o7 ?5 _$ r% x& @看LZ是什么细胞了，我以前养羊膜上皮细胞，就是这种方法传代的，只用胰酶消化是很难传代的。

zhaogy604

我的经验是如果用低浓度的胰酶消化，15分钟以内是可以接受的，对细胞影响不大，但是不清楚LZ培养的细胞类型