急！急！急！急！CIK细胞实验中出现的问题？？？？

hwlightning

最近养CIK细胞，细胞总是贴壁，悬浮细胞也少，加入CD3和IL-2好像没起到作用，
0 x! T% u. n0 ^3 \# D, o一直贴壁，吹不下来。
: H7 Z6 O' T- ZCIK细胞不是悬浮的吗？为什么会还含有那么多贴壁细胞，如果贴壁细胞多，悬浮细胞就少，成团就会更少，和面再补加一支CD3也不起作用。: v: h* a7 ]& W3 c9 ]
还有一种情况是细胞一直不会扩增，养着养着就会凋亡，细胞团也会凋亡，这会是什么原因？

ly200101042

我也遇见过这种情况 而且有时候细胞贴壁还变型了
" g. O: @7 e3 A是不是细胞太多太挤了啊 有时候我要是分的细胞多 就会出现这种情况啊

hwlightning

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# L% q, g( _7 O! J' Q, z% x6 W7 X/ p5 C( B
CIK细胞应该是不贴壁的，也不会因为细胞多而变型，你分离的时候是不是红细胞很多，
: T' i8 ~; e% q. w' b. m想过怎么去除红细胞没？

ly200101042

我用过溶血素 但有时候嫌麻烦啊

woosheng

  G1 Q$ b9 i+ k. @5 i% l
, P8 f0 Z, w6 _* k可能是单核细胞。PBMC里有除了淋巴细胞以外还包含有单核细胞。单核细胞容易贴壁，分化成DC和巨噬细胞。- E" g) J  ~& }1 n# T4 y
加CD3抗体和IL-2是没有用的。

lyj-0017

回复 hwlightning 的帖子6 W/ a/ }- y" P! P9 f8 q
5 o# Q1 `: N0 A$ z( {
你好，我们现在培养CIK液出现你说的这种情况。培养几天后，培养基颜色根本不怎么发生变化，培养液中也有絮状物，像是细胞成团，最后收集的数量非常少。你们现在这个问题找到原因了吗？是如何改善的呢？

ljl1988115

单核细胞比较多吧

meister

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# D$ e/ H3 u8 j6 m4 J
- w/ D! g( I7 p* a细胞不长，出现许多絮状，是细胞死了！

lyj-0017

回复 meister 的帖子8 k. p! L4 P& V' l7 w' i, |# Y
$ J0 `. I* F% o3 L% F) k0 s5 ]
那么，细胞为什么会自己死掉了呢？是细胞因子没起作用？还是因为营养不足呢？或者别的什么原因？

meister

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+ X& ]7 d  R( P
* i* |* v# }# i! I" [+ V. B细胞会死掉，主要是两个原因， 一是培养基问题。 二是细胞密度过高。" A0 [( Y/ Q; t  K4 L3 m, K3 j7 ?! c
我估计你的是培养基有问题。看看IL-2是不是降解了。