急！急！急！急！CIK细胞实验中出现的问题？？？？

hwlightning

最近养CIK细胞，细胞总是贴壁，悬浮细胞也少，加入CD3和IL-2好像没起到作用，! z0 [. v% J( s
一直贴壁，吹不下来。
+ \5 A# i) Y* @CIK细胞不是悬浮的吗？为什么会还含有那么多贴壁细胞，如果贴壁细胞多，悬浮细胞就少，成团就会更少，和面再补加一支CD3也不起作用。
  L! i; b" V3 X3 U2 f还有一种情况是细胞一直不会扩增，养着养着就会凋亡，细胞团也会凋亡，这会是什么原因？

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' f0 e  b8 L3 R, a
0 H, Y) _) U- M! R! O, c  N5 c你好，最近养CIK细胞，细胞总是贴壁，悬浮细胞也少，加入CD3和IL-2好像没起到作用，* D. R; R6 q' n' ]9 ~5 q) o
一直贴壁，吹不下来，没有克隆团产生。CIK细胞一直不会扩增，养着养着就会凋亡，，这会是什么原因？
0 c. Z( P1 `- ]8 b* V6 w$ F) G8 r" D6 d" `  j9 ?
我的问题跟你去年碰到的情况一样，不知道你解决了吗，能告诉我问题出在哪吗？

kangyi08321

回复 meister 的帖子& g1 p0 p- _$ z, R; s1 {/ G

0 {# r5 P9 s) a8 d; j, s如果你用的是自体血浆啊，如果是自体血浆没有灭活去除血浆中的纤维蛋白原的话，在培养过程中，会出现纤维蛋白原凝结（原理同血液凝固），细胞会被纠缠起来死掉。用自体血浆的话还是先灭活下吧。同胎牛血清灭活补体一样。只是我不知道会不会灭活掉血浆中的一些有效成分，有没有大神在这方面有研究，请指教！

jingjing6837

我养CIK也出现过这种问题，多数是因为单核细胞贴壁的原因，一开始应该先贴壁1.5小时去除单核细胞，然后收集淋巴细胞，在培养的时候如果贴壁细胞很多，要更换培养瓶弃掉贴壁细胞调整细胞密度，这样CIK不会受到影响，可以扩增起来

lyj-0017

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) ~) q& d+ P! @) N0 z9 v% U嗯，也没别的办法，只能平时多观察多比较了，非常感谢

woosheng

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" J4 ]: ~& Z1 s) i: Y
" }" W& |6 r# D说的有道理。仔细观察贴壁细胞，会发现有两种细胞。一种胞体纤细突起多，另一种胞体大突起少。这两种应该都来自单核细胞，会防碍淋巴细胞增殖。

meister

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1 l; e' N' \0 h* n7 F( n& o/ }. d0 j! O, a* [6 ^2 G
因子降解不容易检测。 所以因子要分装， 避免反复冻融。 会不会是细胞密度太高，营养不够就不好说了， 得自己观察。

lyj-0017

回复 meister 的帖子5 L& k8 k1 a$ g5 J4 D

( Z2 f6 F& ?- X' e( h0 B% |, BIL-2降解？这怎么检查IL-2是否降解呢？我们把IL-2加入培养基后一般三四天就会全部加完，平时放在4度冰箱保存，IL-2在这段时间难道会降解吗？* n% @4 i3 r8 M
另外一个，会不会是细胞在增殖较多，而在此之前并没有添加够足量的培养基而导致细胞死掉呢？（也就是你说的细胞密度过高）

DannyXia

可能是单核细胞。CIK是悬浮的。

meister

回复 lyj-0017 的帖子7 y3 z7 l) q3 _3 a1 P4 l, Z7 k

9 o" h. }. u; q/ u  u细胞会死掉，主要是两个原因， 一是培养基问题。 二是细胞密度过高。2 u0 @& C. H& K  O$ ]
我估计你的是培养基有问题。看看IL-2是不是降解了。