乳腺癌CD44+CD24-细胞流式分选

dmmwhb

请教高人，CD44+CD24-乳腺癌干细胞在上流式细胞仪前的荧光抗体标记的具体步骤。有人做过？能说说您的具体步骤吗？先谢谢了

linxiao

帮顶 这个我也想知道

dmmwhb

找到了，自己贴出来大家共享吧

dmmwhb

1、培养细胞消化收集细胞，PBS洗涤至少一次；/ }8 M& p6 o7 S( Z( s7 U' b7 `& ^
2、按106有效细胞与1ug 抗体进行染色，或按照抗体说明书推荐的量进行；
& R8 ?( b) t% V7 G* f- Y; z3、染色通常室温避光15-30分钟，染色体系体积通常在100-500ul；& C' K& Y4 h3 x# z8 u- U
4、染色完成后洗涤至少两次，300g离心5min，弃去上清；
4 s# I$ [# z! U/ ~7 P- ^5、通常加入PBS稀释样本至500-1000ul备检。

笨笨的图图

1、培养细胞消化收集细胞，PBS洗涤至少一次对于敏感的细胞最好含有1%的BSA；  
1 G1 @5 G( y+ h1 B7 d/ ^2、按106有效细胞与1ug 抗体进行染色，或按照抗体说明书推荐的量进行；
4 ?0 @/ E7 d- W$ n4 l# N7 m& }3、染色通常室温避光15-30分钟，染色体系体积通常在100-500ul(流式是没有标准染色体系的，染色前洗一次后去上清，剩余部分液体重悬所有细胞就可以。)* T6 T* Y# H/ Z" i% L$ t
4、染色完成后洗涤至少两次，300g离心5min，弃去上清；2 c& m& g+ G8 ^: q
5、通常加入PBS稀释样本至500-1000ul备检（加入的标准量是终体积500ul，如果不及时上机，可以重悬于500ul的1%多聚甲醛中后上机）。

cocoslee

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5 }6 B) G3 |- P! ^7 N5 w! q
0 o7 M- W( C/ {$ ]: c& E6 LPBS洗涤至少一次对于敏感的细胞最好含有1%的BSA（使细胞的环境更温和一点），+2mmol/EDTA可以防止细胞粘连

笨笨的图图

回复 cocoslee 的帖子; t( g+ {* R* G* A  o
" y- _6 F! N/ S
哦~有道理~谢谢~

cocoslee

回复 笨笨的图图 的帖子5 N! j* Z9 M1 r

5 y7 \( g" T2 [# o" L大家一起交流哈

cocoslee

楼主能把乳腺癌干细胞培养的心得及方法交流一下吗？O(∩_∩)O。

abjym1010

同楼上，求，谢谢