乳腺癌CD44+CD24-细胞流式分选

dmmwhb

请教高人，CD44+CD24-乳腺癌干细胞在上流式细胞仪前的荧光抗体标记的具体步骤。有人做过？能说说您的具体步骤吗？先谢谢了

linxiao

帮顶 这个我也想知道

dmmwhb

找到了，自己贴出来大家共享吧

dmmwhb

1、培养细胞消化收集细胞，PBS洗涤至少一次；+ \2 d' s) _2 t( J- [* H
2、按106有效细胞与1ug 抗体进行染色，或按照抗体说明书推荐的量进行；7 p/ U0 k) Z7 M; W
3、染色通常室温避光15-30分钟，染色体系体积通常在100-500ul；
. _( s( v; o4 _9 k4 c" r4、染色完成后洗涤至少两次，300g离心5min，弃去上清；
' L8 P4 o$ q+ B' O" q* O5、通常加入PBS稀释样本至500-1000ul备检。

笨笨的图图

1、培养细胞消化收集细胞，PBS洗涤至少一次对于敏感的细胞最好含有1%的BSA；  / V- I; L: U, @  ]+ o
2、按106有效细胞与1ug 抗体进行染色，或按照抗体说明书推荐的量进行；/ ~* a) Z/ W: t
3、染色通常室温避光15-30分钟，染色体系体积通常在100-500ul(流式是没有标准染色体系的，染色前洗一次后去上清，剩余部分液体重悬所有细胞就可以。)  Q0 u: [! ]2 y! g( m
4、染色完成后洗涤至少两次，300g离心5min，弃去上清；6 g% X8 v; k7 c# g
5、通常加入PBS稀释样本至500-1000ul备检（加入的标准量是终体积500ul，如果不及时上机，可以重悬于500ul的1%多聚甲醛中后上机）。

cocoslee

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  G' T# F# h$ Y9 o3 a) D0 h1 W: Y4 H: y  ]8 A4 O4 R
PBS洗涤至少一次对于敏感的细胞最好含有1%的BSA（使细胞的环境更温和一点），+2mmol/EDTA可以防止细胞粘连

笨笨的图图

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' _& n) E- o2 h& |4 t; f" m7 {" Q, `5 J2 I
哦~有道理~谢谢~

cocoslee

回复 笨笨的图图 的帖子8 [" \$ ^4 ?1 g" C5 p0 v
& T5 W2 P) _" o0 x3 F7 Q; j+ @/ P
大家一起交流哈

cocoslee

楼主能把乳腺癌干细胞培养的心得及方法交流一下吗？O(∩_∩)O。

abjym1010

同楼上，求，谢谢