乳腺癌CD44+CD24-细胞流式分选 - 肿瘤干细胞专区干细胞之家



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查看: 86584\|回复: 13	go 乳腺癌CD44+CD24-细胞流式分选 [复制链接]

dmmwhb

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楼主

发表于 2012-2-8 14:39 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请教高人，CD44+CD24-乳腺癌干细胞在上流式细胞仪前的荧光抗体标记的具体步骤。有人做过？能说说您的具体步骤吗？先谢谢了

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linxiao

新手上路

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沙发

发表于 2012-2-8 15:33 |只看该作者

帮顶这个我也想知道

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dmmwhb

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藤椅

发表于 2012-2-18 09:11 |只看该作者

找到了，自己贴出来大家共享吧

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板凳

发表于 2012-2-18 09:17 |只看该作者

1、培养细胞消化收集细胞，PBS洗涤至少一次；$ ?4 q) Q* k, n' [
2、按106有效细胞与1ug 抗体进行染色，或按照抗体说明书推荐的量进行；1 V# C) K6 j, T2 c: K$ z& K
3、染色通常室温避光15-30分钟，染色体系体积通常在100-500ul；5 m9 i) Q# o4 q0 f" s6 ?$ @- |
4、染色完成后洗涤至少两次，300g离心5min，弃去上清；5 f% O( r8 }: L* J* A$ [7 o. U* P
5、通常加入PBS稀释样本至500-1000ul备检。

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笨笨的图图

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报纸

发表于 2012-3-16 13:53 |只看该作者

1、培养细胞消化收集细胞，PBS洗涤至少一次对于敏感的细胞最好含有1%的BSA；
2、按106有效细胞与1ug 抗体进行染色，或按照抗体说明书推荐的量进行；
3、染色通常室温避光15-30分钟，染色体系体积通常在100-500ul(流式是没有标准染色体系的，染色前洗一次后去上清，剩余部分液体重悬所有细胞就可以。)
4、染色完成后洗涤至少两次，300g离心5min，弃去上清；9 c7 L* z8 n9 c. C5 k: W; j
5、通常加入PBS稀释样本至500-1000ul备检（加入的标准量是终体积500ul，如果不及时上机，可以重悬于500ul的1%多聚甲醛中后上机）。