乳腺癌CD44+CD24-细胞流式分选

dmmwhb

请教高人，CD44+CD24-乳腺癌干细胞在上流式细胞仪前的荧光抗体标记的具体步骤。有人做过？能说说您的具体步骤吗？先谢谢了

linxiao

帮顶 这个我也想知道

dmmwhb

找到了，自己贴出来大家共享吧

dmmwhb

1、培养细胞消化收集细胞，PBS洗涤至少一次；: E! F, ~3 C% w6 h, \
2、按106有效细胞与1ug 抗体进行染色，或按照抗体说明书推荐的量进行；8 W/ }6 s. c8 b2 d3 @4 M
3、染色通常室温避光15-30分钟，染色体系体积通常在100-500ul；
+ t: g+ |. W/ x" ~4、染色完成后洗涤至少两次，300g离心5min，弃去上清；
% o- p) C, {: |+ |& S' _5、通常加入PBS稀释样本至500-1000ul备检。

笨笨的图图

1、培养细胞消化收集细胞，PBS洗涤至少一次对于敏感的细胞最好含有1%的BSA；  9 }, S* G9 d0 \/ S) v
2、按106有效细胞与1ug 抗体进行染色，或按照抗体说明书推荐的量进行；
  ^- u. n8 S" P  w7 r4 p9 q6 S3、染色通常室温避光15-30分钟，染色体系体积通常在100-500ul(流式是没有标准染色体系的，染色前洗一次后去上清，剩余部分液体重悬所有细胞就可以。)
9 X2 D$ A) P5 V* B0 r4、染色完成后洗涤至少两次，300g离心5min，弃去上清；: l) R1 a( }( L. X2 R. y% r
5、通常加入PBS稀释样本至500-1000ul备检（加入的标准量是终体积500ul，如果不及时上机，可以重悬于500ul的1%多聚甲醛中后上机）。

cocoslee

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9 J4 ?' a' j) K& J# N# f9 `
6 F+ u& F& X, u0 hPBS洗涤至少一次对于敏感的细胞最好含有1%的BSA（使细胞的环境更温和一点），+2mmol/EDTA可以防止细胞粘连

笨笨的图图

回复 cocoslee 的帖子# E" ~( k+ v: Y; C
. e8 F6 N4 @5 b# Q" Z! c  n# E; f
哦~有道理~谢谢~

cocoslee

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& i& n/ l" R- }9 R( m; {  r* O9 [7 R7 k& O9 p& i: e
大家一起交流哈

cocoslee

楼主能把乳腺癌干细胞培养的心得及方法交流一下吗？O(∩_∩)O。

abjym1010

同楼上，求，谢谢