流式造血干细胞计数 求助

zark_00

! t' @6 Q8 p( \) _这是未经动员的外周血 CD34+计数的结果，没有成群的CD34+细胞，所以我很疑惑做得对不对，P2门 里没有成群的，P4,P7门里也没有...., V2 w: a# a0 o& P9 {' V
外周血EDTA 抗凝，室温放置，1小时内处理检测，采血后用全血自动计数仪计数WBC，均为1*E6/100ul左右，不稀释，按20ul PE CD34 和20ul FITC CD45的量配染色液染色，100ul全血+40ul染色混合液，室温避光30分钟孵育。BD 红细胞裂解液1:9比例稀释，2ml1*裂解液避光室温裂解十分钟，不洗，直接加荧光微球，混匀上机。
8 G# W4 s3 l7 x& ]- l请问有做过的道友么，急切的盼望斧正啊~~

linxiao

没有看到图片呀？

zark_00

* [* ?7 x+ y* P- U5 x

; c. s! w6 J  Q0 _; h$ ^5 X

zark_00

试了几次发图，怎么都不行啊，怎么发图啊

细胞海洋

' P. g' p3 T& F- g  |; I5 T. X- B' w/ Y  w# @5 p
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5 I5 j. X  N4 J& V9 x回复 高级模式 附件上传 单个图片不要大于1000kb
( Y& f" ~4 L( w5 l4 ~5 h1 ]# ~& X  ?3 H' ~& w0 O! E$ F
我先帮你处理了

zark_00

细胞海洋 发表于 2012-2-10 01:34 ; ?3 k6 z6 A" G* p3 C1 o5 h! q
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谢谢，我图片和问题都在上面几楼了，请问各位有做过的么，用未经动员外周血，不是用骨髓，也不是用脐带血，能做出可重复性的结果么（CD34+群体明显）。

cell1314

操作步骤没什么问题。正常人PB未经动员的CD34+细胞比例本身很少，大概＜0.5%。就图形来看，以CD45/CD34为图，CD34+细胞主要在CD45弱阳的位置上，即荧光强度10的3次方到10的4次方之间的位置，可以绘图来看看。
+ s& S! z/ z* M$ T9 g0 z$ L有点疑问，SSC/CD45图上看，怎么会有两团疑似中性粒细胞群？你的样本是外周血样本吗？

zark_00

cell1314 发表于 2012-2-14 17:57 9 ?1 i( t4 d! a; e$ U- u
操作步骤没什么问题。正常人PB未经动员的CD34+细胞比例本身很少，大概＜0.5%。就图形来看，以CD45/CD34为图 ...

! `& l9 K9 l' m* A4 O& Q) Y. ~
对，我用的是外周血。。。而且是食蟹猴的（Cynlmogus），用的是BD官网上找的PE CD34, 其说明书明确说可以跟食蟹猴，恒河猴，人源CD34结合，结果做了很多次，都没有明显的成团的阳性群（数量可以大或小，但是一定要成团聚集啊），看文献书籍还有论坛上战友发的人的图，比例再少，也有很清晰的独立的CD34+群体。我的CD45+事件都收集到50W个，总事件都收集到200W个左右了，应该说不是事件数目太少所以不明显的，很郁闷啊。
7 S5 Q# c8 U$ c7 r! U我这相反人血难弄，好容易让同事扎我，指尖采血，用的抗体又不是现在这个，是BD官网上找的明确是用于人源CD34和CD45，结果还是不行（因为现在用的抗体到的比人用抗体晚，所以现在也没试过，同事扎我又怕担责任。。。）

nek314

也可能是克隆的问题，或者品牌的问题，你可以先尝试换换克隆

nek314

你把ssc/cd45的门调整到10^3右侧，我感觉你的图下面的红细胞是不是多了点啊，这样可以把比例提高一点