流式造血干细胞计数 求助

zark_00

) U, C9 n1 u- o/ s& k4 S
这是未经动员的外周血 CD34+计数的结果，没有成群的CD34+细胞，所以我很疑惑做得对不对，P2门 里没有成群的，P4,P7门里也没有....
) A( w# |" d5 b; w& B" V9 z外周血EDTA 抗凝，室温放置，1小时内处理检测，采血后用全血自动计数仪计数WBC，均为1*E6/100ul左右，不稀释，按20ul PE CD34 和20ul FITC CD45的量配染色液染色，100ul全血+40ul染色混合液，室温避光30分钟孵育。BD 红细胞裂解液1:9比例稀释，2ml1*裂解液避光室温裂解十分钟，不洗，直接加荧光微球，混匀上机。
- G  k* C- ^' G( k( Y0 C请问有做过的道友么，急切的盼望斧正啊~~

linxiao

没有看到图片呀？

zark_00

4 ]5 x4 l) S4 _- R( S
3 d+ k$ F" s9 _/ W* B- w

zark_00

试了几次发图，怎么都不行啊，怎么发图啊

细胞海洋

  L, P. s' `# F
# g/ S6 e) c( V  a( s9 {回复 zark_00 的帖子8 g4 R$ M- Y! x) d; Y1 p
( P, T( W6 S7 B2 L0 t
回复 高级模式 附件上传 单个图片不要大于1000kb* _- T% \  a: m+ Q  d2 ^" u3 Y

8 h: F  q: L( {6 v+ `1 A4 r& a我先帮你处理了

zark_00

细胞海洋 发表于 2012-2-10 01:34
0 h1 _* L  m+ q( @; E( ]回复 zark_00 的帖子
0 t  ^, B. {9 \- i* o) Q4 Q: ?- @: ]  p( L& F( K
回复 高级模式 附件上传 单个图片不要大于1000kb

$ f9 o) q- g7 P( {3 B1 R3 V8 ? 谢谢，我图片和问题都在上面几楼了，请问各位有做过的么，用未经动员外周血，不是用骨髓，也不是用脐带血，能做出可重复性的结果么（CD34+群体明显）。

cell1314

操作步骤没什么问题。正常人PB未经动员的CD34+细胞比例本身很少，大概＜0.5%。就图形来看，以CD45/CD34为图，CD34+细胞主要在CD45弱阳的位置上，即荧光强度10的3次方到10的4次方之间的位置，可以绘图来看看。+ Q! O: Q; i: \1 K8 s' b; Q
有点疑问，SSC/CD45图上看，怎么会有两团疑似中性粒细胞群？你的样本是外周血样本吗？

zark_00

cell1314 发表于 2012-2-14 17:57 , O% |0 T( f8 [) V5 C( W
操作步骤没什么问题。正常人PB未经动员的CD34+细胞比例本身很少，大概＜0.5%。就图形来看，以CD45/CD34为图 ...

5 q" e5 g9 R( @8 Q* z' b! ?
对，我用的是外周血。。。而且是食蟹猴的（Cynlmogus），用的是BD官网上找的PE CD34, 其说明书明确说可以跟食蟹猴，恒河猴，人源CD34结合，结果做了很多次，都没有明显的成团的阳性群（数量可以大或小，但是一定要成团聚集啊），看文献书籍还有论坛上战友发的人的图，比例再少，也有很清晰的独立的CD34+群体。我的CD45+事件都收集到50W个，总事件都收集到200W个左右了，应该说不是事件数目太少所以不明显的，很郁闷啊。& p! V0 U  g& W) ^1 h
我这相反人血难弄，好容易让同事扎我，指尖采血，用的抗体又不是现在这个，是BD官网上找的明确是用于人源CD34和CD45，结果还是不行（因为现在用的抗体到的比人用抗体晚，所以现在也没试过，同事扎我又怕担责任。。。）

nek314

也可能是克隆的问题，或者品牌的问题，你可以先尝试换换克隆

nek314

你把ssc/cd45的门调整到10^3右侧，我感觉你的图下面的红细胞是不是多了点啊，这样可以把比例提高一点