流式造血干细胞计数 求助

zark_00

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这是未经动员的外周血 CD34+计数的结果，没有成群的CD34+细胞，所以我很疑惑做得对不对，P2门 里没有成群的，P4,P7门里也没有....% B1 N; \2 z6 |3 _% \0 H4 Q. d
外周血EDTA 抗凝，室温放置，1小时内处理检测，采血后用全血自动计数仪计数WBC，均为1*E6/100ul左右，不稀释，按20ul PE CD34 和20ul FITC CD45的量配染色液染色，100ul全血+40ul染色混合液，室温避光30分钟孵育。BD 红细胞裂解液1:9比例稀释，2ml1*裂解液避光室温裂解十分钟，不洗，直接加荧光微球，混匀上机。/ t! K, z( ~1 ?0 U5 k, H
请问有做过的道友么，急切的盼望斧正啊~~

zark_00

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! @1 u4 @3 W/ S' m  w

zark_00

试了几次发图，怎么都不行啊，怎么发图啊

zark_00

细胞海洋 发表于 2012-2-10 01:34
: }" `# m  @5 r; B( k" Q7 v回复 zark_00 的帖子
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回复 高级模式 附件上传 单个图片不要大于1000kb

! b7 C5 I0 b1 C5 u$ u) O 谢谢，我图片和问题都在上面几楼了，请问各位有做过的么，用未经动员外周血，不是用骨髓，也不是用脐带血，能做出可重复性的结果么（CD34+群体明显）。

zark_00

cell1314 发表于 2012-2-14 17:57
+ f! D+ r' z  T) V- V- A1 ^* |操作步骤没什么问题。正常人PB未经动员的CD34+细胞比例本身很少，大概＜0.5%。就图形来看，以CD45/CD34为图 ...

( ]+ z, G4 D0 u7 X; q4 \对，我用的是外周血。。。而且是食蟹猴的（Cynlmogus），用的是BD官网上找的PE CD34, 其说明书明确说可以跟食蟹猴，恒河猴，人源CD34结合，结果做了很多次，都没有明显的成团的阳性群（数量可以大或小，但是一定要成团聚集啊），看文献书籍还有论坛上战友发的人的图，比例再少，也有很清晰的独立的CD34+群体。我的CD45+事件都收集到50W个，总事件都收集到200W个左右了，应该说不是事件数目太少所以不明显的，很郁闷啊。. d5 h8 @  q; B6 f
我这相反人血难弄，好容易让同事扎我，指尖采血，用的抗体又不是现在这个，是BD官网上找的明确是用于人源CD34和CD45，结果还是不行（因为现在用的抗体到的比人用抗体晚，所以现在也没试过，同事扎我又怕担责任。。。）