小鼠骨髓间充质干细胞（图）

jyf200383

小弟培养C57小鼠骨髓间充质干细胞已近3个月，结果不满意，基本情况如下：
7 q; D9 z8 o) ?$ v骨髓冲洗法取小鼠胫腓骨骨髓，全骨髓原代培养，用的是DF12，10%南美血清，48h首次换液，2~3天全量换液，有以下问题想请教各位前辈：: m4 l6 c  j4 {( L8 P% P
1.目前这一批P0第9天，感觉也就50~60%而且与3天前相比似乎没什么太大变化，好像不长了一样（我是每只小鼠，两条后腿的骨髓种在一个25cm瓶里），请教C57 BMSCs的生长周期？
" v" A1 ~2 E& [8 d$ u, S2.细胞大致呈现两种形态，一种小的（有类圆形，大多为长针型），一种大的（或不规则，或扁长，且此种细胞聚集在一起似伤口结痂般，特别难看），而且两种细胞在生长密集的区域似乎呈复层生长，请教哪种是MSC？或者大细胞是老化的？几代以后会不会变的更纯/均一一些？（因为以前养的几批到P3就不长了，不知道怎么回事）. d, A. {: C) ?% w- z  i

2 ?: `, m& m# b' f. n" C/ rPS：图片分别为3瓶细胞两种倍率下的图片

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jyf200383

: f( s+ Y; U$ q6 J& A5 Y, p& E+ U- D% W- I
这是那种很奇怪的、很丑的细胞% s6 Q+ f, O+ |% u5 S2 {4 b" r$ K

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有没有高手帮忙看一下~万分感谢！！

jyf200383

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! V, _( [. y( x+ v6 g" H+ [6 f- q2 o# f# w) D- w
谢谢您的回答3 t3 u% ^3 `# O+ X1 w& B7 m
您意思是那些难看的细胞（就是下面两张图）是MSC？
1 a! F4 Y9 r; _5 G那么传到多少代可以相对比较纯化呢？大约几天传？几比几传？
4 `8 Y  {7 y# r; A3 I2 E您说的纯化具体怎么纯化呢？就是单纯靠传代么？？. d* K; i" C/ s" N4 n

jyf200383

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, W; i, M. x5 P6 W: u9 E8 v9 t3 S, ?' }& }# d% L. L/ t. {+ C; Q
我的细胞最多养到3代就不行了，细胞要么变大变扁，要么就是不长了，您能不能跟我具体说说你的方法呀？？现在实验因为细胞养的不好无法进行下去，特别特别着急，恳求您能不能好心跟我交流交流，好多问题想想请教，我的QQ是283214830，万分感谢！！！！

jyf200383

回复 illidancui 的帖子% D1 l, F& r2 r# p% x" k

$ D2 q! ]* o, E: T嗯 谢谢！跟你说的情况类似···消化比较难，传代后基本不见长。这两周我试了频繁换液的方法，3~4h首次换液，之后每8h换液一次，直到72h，感觉效果更差，留下来的细胞少的可怜。准备下一步试试骨片法。
( `4 a5 d! f% H4 b$ M. a5 I" ]有么有高人出现指导一下啊，愁死我了