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小鼠骨髓间充质干细胞(图) [复制链接]

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楼主
发表于 2012-2-20 11:27 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
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小弟培养C57小鼠骨髓间充质干细胞已近3个月,结果不满意,基本情况如下:
4 t* p- a# w: c$ I骨髓冲洗法取小鼠胫腓骨骨髓,全骨髓原代培养,用的是DF12,10%南美血清,48h首次换液,2~3天全量换液,有以下问题想请教各位前辈:
7 ?7 B8 P  r9 H8 F6 n1.目前这一批P0第9天,感觉也就50~60%而且与3天前相比似乎没什么太大变化,好像不长了一样(我是每只小鼠,两条后腿的骨髓种在一个25cm瓶里),请教C57 BMSCs的生长周期?, S' C; x3 @1 ]2 A$ r/ Z
2.细胞大致呈现两种形态,一种小的(有类圆形,大多为长针型),一种大的(或不规则,或扁长,且此种细胞聚集在一起似伤口结痂般,特别难看),而且两种细胞在生长密集的区域似乎呈复层生长,请教哪种是MSC?或者大细胞是老化的?几代以后会不会变的更纯/均一一些?(因为以前养的几批到P3就不长了,不知道怎么回事)
2 C) P" q/ }2 s5 l( y; Q
/ C) o  L4 a6 j" I% t; rPS:图片分别为3瓶细胞两种倍率下的图片
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沙发
发表于 2012-2-20 11:31 |只看该作者

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藤椅
发表于 2012-2-20 11:37 |只看该作者
本帖最后由 jyf200383 于 2012-2-20 11:40 编辑
( q6 k5 ?# p( c. K" O
7 w. P. Q5 T' W# E8 R/ H; i6 R这是那种很奇怪的、很丑的细胞% z1 f. U4 S0 g4 j, u) A

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板凳
发表于 2012-2-20 20:22 |只看该作者
有没有高手帮忙看一下~万分感谢!!

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报纸
发表于 2012-2-23 01:07 |只看该作者
回复 jyf200383 的帖子3 \. {5 ]+ \: e
2 {+ Y" F, d4 [
感觉细胞不纯,形态的确很怪,应为梭状* L. `1 ]" t/ s* l( z
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地板
发表于 2012-2-23 12:53 |只看该作者
间充质干细胞应该是你所谓的"或不规则,或扁长,且此种细胞聚集在一起似伤口结痂般",原代的骨髓间充质细胞应该是成集落生长的,其他细胞多为杂细胞,在以后的传代过程中,间充质细胞逐渐纯化,呈长梭形。但是你这张图跟我以前的原代图不大一样,不大明白。
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优秀会员 金话筒

7楼
发表于 2012-2-23 22:08 |只看该作者
回复 jyf200383 的帖子" X( q2 c) F- j& _' ~7 x

" K6 S# [8 \) m感觉是骨髓吹下来后没注意摇匀,导致局部的细胞极其紧密,细胞空间受到压缩。另外一种,这些细胞看起来像是内皮的表型。
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发表于 2012-2-28 09:26 |只看该作者
回复 lixf 的帖子2 I; [  ~/ ^- {6 A* k4 y
9 [8 \2 f: b" x0 j; d) W$ g
谢谢您的回答
1 ?& k6 c& P) t! h3 D( y您意思是那些难看的细胞(就是下面两张图)是MSC?
- ?( H! W- m. m, E那么传到多少代可以相对比较纯化呢?大约几天传?几比几传?
$ ~" X3 r5 U2 o您说的纯化具体怎么纯化呢?就是单纯靠传代么??
' r7 k' k8 o7 U' N) b' X- t" d6 c
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9楼
发表于 2012-2-28 16:29 |只看该作者
回复 jyf200383 的帖子
$ a& H" T& a/ r! `" B+ Q4 `  T& U* {" a3 m; A, t
不好意思,我没看见那两张图0 w8 V" U" d$ q% z& i" V
一般传到3~4代基本上就很纯了  我一般是3~4天传一代,一般1:3传
2 I% |  x* a. `* @在逐渐的传代过程中杂细胞会越来越少,因此不需要特殊的处理来纯化间充质细胞
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发表于 2012-2-28 17:05 |只看该作者
回复 lixf 的帖子
" ]! N. m3 r+ N1 r, b( Y. M- O7 ~# T5 x! k2 D
我的细胞最多养到3代就不行了,细胞要么变大变扁,要么就是不长了,您能不能跟我具体说说你的方法呀??现在实验因为细胞养的不好无法进行下去,特别特别着急,恳求您能不能好心跟我交流交流,好多问题想想请教,我的QQ是283214830,万分感谢!!!!
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