小鼠骨髓间充质干细胞（图）

jyf200383

小弟培养C57小鼠骨髓间充质干细胞已近3个月，结果不满意，基本情况如下：( p( d2 O5 ?1 b4 u. s
骨髓冲洗法取小鼠胫腓骨骨髓，全骨髓原代培养，用的是DF12，10%南美血清，48h首次换液，2~3天全量换液，有以下问题想请教各位前辈：! g7 I# H: P+ S0 J& X0 |1 q. m, U
1.目前这一批P0第9天，感觉也就50~60%而且与3天前相比似乎没什么太大变化，好像不长了一样（我是每只小鼠，两条后腿的骨髓种在一个25cm瓶里），请教C57 BMSCs的生长周期？6 ^( w2 v) e/ a8 u$ k1 B8 {9 s4 Q
2.细胞大致呈现两种形态，一种小的（有类圆形，大多为长针型），一种大的（或不规则，或扁长，且此种细胞聚集在一起似伤口结痂般，特别难看），而且两种细胞在生长密集的区域似乎呈复层生长，请教哪种是MSC？或者大细胞是老化的？几代以后会不会变的更纯/均一一些？（因为以前养的几批到P3就不长了，不知道怎么回事）
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* ~9 W- E9 ^2 \/ G3 n( I# F8 [  bPS：图片分别为3瓶细胞两种倍率下的图片

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" b7 s6 n* l. ?6 r+ ^) P
2 {% s3 J. P4 F( b, p9 z这东西肯定传不了代的，对不

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( n; S; @9 ^* a( x
0 ^( C. J* ^; Q% Q! b我的也是这样

jyf200383

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. c$ i$ z: v( u* P% x1 b  ~
' j* a& ]8 e6 Z嗯 谢谢！跟你说的情况类似···消化比较难，传代后基本不见长。这两周我试了频繁换液的方法，3~4h首次换液，之后每8h换液一次，直到72h，感觉效果更差，留下来的细胞少的可怜。准备下一步试试骨片法。
# S$ \) a* R9 B9 I/ V% a有么有高人出现指导一下啊，愁死我了

illidancui

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! i& |% F$ S( w' O* y/ x! M
我之前也养过c57的MSC，情况差不多，容易聚集到一起，而且消化很难下来，传代后不长。比人和大鼠的难养的多。后来就放弃了。
- \2 F1 ^8 P8 _% r不过看到论坛说换液频率高一点会好，我自己试过影响不大。用骨片法做出来的可能要好一些，自己没试过，你看以试试看。

细胞海洋

回复 小滚415 的帖子3 O. F4 z6 q" x5 l( ~( S& ^

8 o; G* h! P1 d4 q+ e) ]( s建议你发新帖提问 毕竟论坛人多 你可以从大家的解答中看到很多不同意见

细胞海洋

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5 _  S0 Y( T+ J* W. h
# {* b! }# K, j% h建议你发新帖提问 毕竟论坛人多 你可以从大家的解答中看到很多不同意见

小滚415

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* v( B- H- e: n  X. M
6 B6 q' ]+ M. V6 P2 U你好，我看到你在别人发的关于小鼠间充质干细胞的帖子上留言。我想问一下，你是在养这个细胞吗？能请教一下关于培养这个细胞的经验吗？QQ50472408，这是我的联系方式，希望能得到宝贵意见。

jyf200383

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# h8 v& g# ]( |# }% m  G, S/ A$ E4 p$ S: M1 s
我的细胞最多养到3代就不行了，细胞要么变大变扁，要么就是不长了，您能不能跟我具体说说你的方法呀？？现在实验因为细胞养的不好无法进行下去，特别特别着急，恳求您能不能好心跟我交流交流，好多问题想想请教，我的QQ是283214830，万分感谢！！！！

lixf

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* _; p6 S' d* d+ ~/ Z0 X
% s) U& K2 r6 R% s  N7 \6 r不好意思，我没看见那两张图8 g' [4 S. M, p, p
一般传到3~4代基本上就很纯了  我一般是3~4天传一代，一般1:3传( s, b& j: w1 g- n1 ]  h% g
在逐渐的传代过程中杂细胞会越来越少，因此不需要特殊的处理来纯化间充质细胞