小鼠骨髓间充质干细胞（图）

jyf200383

小弟培养C57小鼠骨髓间充质干细胞已近3个月，结果不满意，基本情况如下：
  g( k8 O# S1 r! A( k骨髓冲洗法取小鼠胫腓骨骨髓，全骨髓原代培养，用的是DF12，10%南美血清，48h首次换液，2~3天全量换液，有以下问题想请教各位前辈：
' z6 k5 N1 f8 E- |1.目前这一批P0第9天，感觉也就50~60%而且与3天前相比似乎没什么太大变化，好像不长了一样（我是每只小鼠，两条后腿的骨髓种在一个25cm瓶里），请教C57 BMSCs的生长周期？
! d* F. X! U; c2.细胞大致呈现两种形态，一种小的（有类圆形，大多为长针型），一种大的（或不规则，或扁长，且此种细胞聚集在一起似伤口结痂般，特别难看），而且两种细胞在生长密集的区域似乎呈复层生长，请教哪种是MSC？或者大细胞是老化的？几代以后会不会变的更纯/均一一些？（因为以前养的几批到P3就不长了，不知道怎么回事）/ X' k' ]- ^# q$ o0 _

! i! }) ~7 `5 }3 e2 iPS：图片分别为3瓶细胞两种倍率下的图片

jyf200383

jyf200383

: g% U8 Q4 F: q( m
8 ~" e: V8 \- w; S) P$ q! E7 g
这是那种很奇怪的、很丑的细胞
. Z& ~/ S) f/ w

jyf200383

有没有高手帮忙看一下~万分感谢！！

wdx0502

回复 jyf200383 的帖子' y- k. [# P5 s1 e- V3 ^
% g3 v9 b1 b; A$ r4 Q# ~5 Q9 V
感觉细胞不纯，形态的确很怪，应为梭状
- K  B$ X5 D1 @- r: ?; |& p

lixf

间充质干细胞应该是你所谓的"或不规则，或扁长，且此种细胞聚集在一起似伤口结痂般"，原代的骨髓间充质细胞应该是成集落生长的，其他细胞多为杂细胞，在以后的传代过程中，间充质细胞逐渐纯化，呈长梭形。但是你这张图跟我以前的原代图不大一样，不大明白。

luoziwei

回复 jyf200383 的帖子) M, T& J& O# b) n' t3 g

, O# x) H! ^' @8 T! D4 K感觉是骨髓吹下来后没注意摇匀，导致局部的细胞极其紧密，细胞空间受到压缩。另外一种，这些细胞看起来像是内皮的表型。

jyf200383

回复 lixf 的帖子
" e0 s, d6 Q  j3 Q& }' T. g# g; h( {- L2 b6 E& W
谢谢您的回答
* R: L" Z. F5 B7 {( N- D# Q您意思是那些难看的细胞（就是下面两张图）是MSC？8 W, H8 M# Y1 p6 J7 I) C
那么传到多少代可以相对比较纯化呢？大约几天传？几比几传？
4 d( @, x1 ?8 o% S2 T& J# Z$ W- H% Y您说的纯化具体怎么纯化呢？就是单纯靠传代么？？
" b# }, {+ u) L

lixf

回复 jyf200383 的帖子- J! }4 C; y8 H9 x; T: S" c

& Y, ]( j2 F; L) A不好意思，我没看见那两张图8 L! T# F9 v  n2 g, b, c5 A3 j
一般传到3~4代基本上就很纯了  我一般是3~4天传一代，一般1:3传
2 z, a0 y. u/ h+ K8 c在逐渐的传代过程中杂细胞会越来越少，因此不需要特殊的处理来纯化间充质细胞

jyf200383

回复 lixf 的帖子3 V7 S4 ~- X: c7 F

" g4 P$ E/ f: w8 H+ t( V6 k/ x% u我的细胞最多养到3代就不行了，细胞要么变大变扁，要么就是不长了，您能不能跟我具体说说你的方法呀？？现在实验因为细胞养的不好无法进行下去，特别特别着急，恳求您能不能好心跟我交流交流，好多问题想想请教，我的QQ是283214830，万分感谢！！！！