请教干细胞成骨成脂染色及染色方法

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' x1 z/ S/ L; R8 ^8 p( `! K! L
成脂：
9 w2 r' l  |. F6 G' A 油红-O染料：
, ^: S4 k1 f2 T" ^% J2 s       储液：0.7g油红-O溶解在200ml的异丙醇中，0.2um滤器过滤（除去沉淀），室温储存。+ W4 G/ L9 T, K; Q: B4 k. g/ p9 d! V
      工作液：配成上述浓度60%的浓度，即加30ml储液，20ml蒸馏水，混匀，室温放置30min，若有眼见的沉淀物，可再次过滤，24h内使用。
4 H( |5 X) X7 v: X& @染色：% D; Q; |% T; a) G
固定：弃去培养基，DPBS洗涤2遍，4%多聚甲醛固定10min，弃去固定液，DPBS洗涤3遍（此步后可在4度保存半个月）- ]" K  M5 j! T! i! }
         六孔板中每孔加2ml油红-O染料，室温孵育20~60min。* @/ j, d& \4 J2 |! }
脱色：用2ml DPBS洗涤直至背景色干净，注意一定要洗干净（不要加太多的DPBS洗涤，否则会将染料浮起得更高将皿壁也染上），有效的洗完之后，加入2ml的DPBS,倒置显微镜下观察。7 P: {+ d; K' p7 F3 M+ l3 n: E

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9 [$ t. v3 I- N) b1 r/ u成骨：7 C( g8 J5 h$ h+ {' b# q
（1）染液配制：: }: w4 n6 l) X3 P8 ~9 J/ a( R
1g的茜素红S溶解于100ml的蒸馏水中，用0.1M的NaOH调节pH至4.1–4.3 ,0.2mM滤膜过滤，室温避光保存
7 _. c5 M: t9 J1 ~0 t（2）染色5 i$ Z4 l* N! b! e2 Z* s5 n
1、弃去培养基，用DPBS洗涤3遍9 E* B. }9 E& f; B
2. 4%多聚甲醛室温至少固定15min。  D0 Z3 R& m2 U1 q7 f
3. 1%茜素红染液固定10min。. u, J7 v" a' M
4. DPBS洗涤细胞，以尽量去除残余的染液。+ q( q+ v3 m& ]4 e7 M; N
5、加入DPBS，拍照。! P( `  ~# n  N8 r7 x3 N

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* \5 v* B, G- a3 K# ^我用的是1%的，我曾经尝试过0.1%，在同样的时间内是染不出来的，也许延长染色时间可以，但我没有尝试过！