请教！我用无血清培养基养的胃癌原代细胞，为什么会出现这种小颗粒？

暮色英雄

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我是用无血清NB培养基+EGF+bFGF+B27+p/s双抗的培养基培养的胃癌原代细胞，培养基已经用0.22μm过滤器过滤除菌，但是培养细胞之后出现很多小颗粒，不知道是什么东西，这照片是昨天照的，今天再观察的时候这些小颗粒已经长满了，我师姐帮我看了说是污染，然后我把细胞倒掉了，但是她也不知道这是什么污染。希望各位大侠能帮小弟看看这到底是不是污染，是什么东西？谢谢了
& _! ^* _$ S- K$ `2 L8 R: F  G' r( U这是20x镜拍的- @$ Y  j/ a/ y3 o

2012-3-6 12:33 上传

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2012-3-6 12:38 上传

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evial

还有就是你的操作没注意无菌要求，或者细胞房不是很干净了

evial

外科主刀在切下肿瘤后要快速放入培养基里面，有时他们不知道你要做什么实验，因为有的试验不做细胞培养不用无菌操作对待，那么他或者护士可能放在不是无菌的地方，手术台上盘子是无菌的，但是周围其他东西是有菌的，如果碰过那么脑瘤也会染菌。你要告诉他们你的目的，外科医生都会懂得，无菌操作是外科基本常识。
/ l4 j$ V: I9 E3 F" h为什么要用DMSO呢？你那里看来这种方法？那是用来冻存细胞的，用来稳定细胞不要被冰晶涨破，多少对细胞有点不好。所以你要是直接提细胞的就放在一般培养基里面带到实验室好了，时间短的话平衡液、生理盐水都可以的。医用静脉级别的平衡液、生理盐水要比PBS好，人静脉都能用没有致热源更没有细菌，所以你可以去医院搞一点来。比你买PBS又便宜又安全。

暮色英雄

回复 holywater 的帖子6 g' q' w+ @; q. s' j# }, U3 ]
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额，我的肿瘤组织是来源于医院，我们跟医院合作的，他们切下肿瘤，然后我过去拿。顺便说一下，他们切下肿瘤的时候是放在保存液里面4度保存的（DMEM：FBS：DMSO=7:2:1），不知道这个组织冻存液配方有没有问题。从切下肿瘤到我拿回实验室，中间大概有5个小时

暮色英雄

回复 evial 的帖子
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我在培养两种原代，胃癌和胶质瘤的，都是遇到这种问题。两天前我单独把培养基倒出来培养，并且把加了EGF和bFGF的培养基也单独倒出来培养，今天发现，加了EGF和bFGF的培养基的这盘里面长满了小圆球，而且还在动，估计是EGF和bFGF污染了，不是来自肿瘤组织

evial

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我一直在想组织用酒精浸泡的事，从科学角度看问题么，越辩越明是好事。酒精可以是蛋白质瞬间凝固，肝癌有的可以用酒精灌注就是利用组织坏死的原理杀死部分癌细胞，但用的是无水酒精还有脱水作用。但在细胞坏死时释放各种坏死因子，我没做过调研，外面的细胞浸泡酒精坏死了会不会对里面的组织产生影响，逐而影响实验结果？

细胞海洋

大家围绕学术问题互相交流 不要互相指责 大家的出发点都是好的 不要因为观点不同而互相攻击。) Y( x/ T9 C6 o: b: q' Z& V4 R: u

# Y1 j) c" S/ ?7 k8 @" A/ o两位朋友握握手 没必要这样的 5 E8 Q+ M6 K+ z& X$ f1 f
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holywater

楼主是问培养，某人说什么手术的请一边去，跑题还有理了。不和你玩了，说实在的，我看到某些人帖子写的非常可笑，我都懒的理--现在省事了。. W2 a5 {; l+ p. o% J7 b. J
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说实在的我回帖子是看得起你，但是你就这样子，算啦。今后除了有美女请教我，我才不去纠正别人错误呢～～

evial

脑组织是无菌的，只要注意无菌操作应该是不会污染的，而胃黏膜是有菌的。小鼠可以酒精浸泡一下再取骨髓。你试过在培养基里面加点酒精或者其他消毒液看看细胞会不会死？  ~" \/ G, X' T3 L: T; P0 Z
这和审题有关么？你写的内容已经给大家看到了么，你写了标题没有啊，大家都没看到你有标题么！
( |0 f7 ~+ c/ c那本老外写的protocal我们一起看看吧，那里写着用来培养的组织块可以用酒精或其他消毒液泡？
* O9 s/ A$ Z" G% m" a我是外科的，酒精在消毒剂中不是最强的。培养房的表面消毒我们用次氯酸钠消毒片做的水擦洗，连肝炎病毒都可以杀死，你要不试试用来泡组织？
( z! q6 B/ Y4 h干细胞之家是交流学术的场地，不是小朋友吵架的。做科研和做人都要踏踏实实！

holywater

为什么我到哪儿都遇到这种人，题目都不看好就乱反对别人的？还你有没有做过手术，我没做过手术但是我做过200次的神经元原代培养！
4 Z: f- I( d) P
( Y8 ^+ e4 Z7 S7 K0 ?论手术，我可能只会用菜刀切猪肉，但是论原代培养，那你就像婴儿画画。