干细胞成骨染色

wuyannini

这几天一直在弄干细胞成骨染色的实验，之前查了好多资料，就拿配制茜素红的溶液来说，有的用Tris-Hcl缓冲液，有的用PBS，有的用蒸馏水的；而茜素红的浓度，有的用1%茜素红，有的用0.1%茜素红，给我弄得头大。我刚刚做成功，给大家分享一下。
5 r* a4 T* ?, ^  p* z4 I, z2 e成骨茜素红染色方法：* F: ?0 l$ D, }: O: n9 s' p. I
1、细胞用PBS 冲洗2-3遍；8 |/ f$ G8 Z$ x( p2 _/ ]% J
2、 4%福尔马林固定15分钟；. f' l; |; K+ Q3 p: o( x; q* b% E
3、 PBS 冲洗1-2遍；+ S1 Y5 }# k/ o0 ]5 {* |
4 、加入0.1%茜素红，孵育10分钟；, J4 k  \4 R# s: X
注：不要用1%的茜素红，孵育完毕后起染液好多去除不掉，为了试试这个浓度的，浪费了我一个培养板的细胞。刚配置好的溶液可以10分钟以上，放置一段时间以后的溶液就要时间短一些。时间不要过长，否则染液不易去除。当然跟室内温度也有一定的关系，温度越高，时间也短。- d, Z& C2 _- v/ Z, [& `
5、 PBS洗涤细胞，尽量去除残余的染液；' ~% v% x3 Z- M
6、 拍照
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0.1%茜素红的配制：0 g2 \% @" ~' \. \) ]6 Z
1、首先配制0.1mol/l 的Tris-Hcl缓冲液：若配制100ml该溶液，先加入Tris base 1.211g,再缓慢加入盐酸使PH值达到7.5；
( z2 }. c# T$ p1 t4 W2、称取0.1g茜素红加入到配制好的0.1mol/l 的Tris-Hcl缓冲液；
7 J/ ?+ E2 t+ z+ K) u3、0.22um滤膜过滤备用。
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