干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 17112|回复: 1
go

[讨论] 干细胞成骨染色 [复制链接]

Rank: 2

积分
106 
威望
106  
包包
498  
楼主
发表于 2012-3-6 20:38 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
这几天一直在弄干细胞成骨染色的实验,之前查了好多资料,就拿配制茜素红的溶液来说,有的用Tris-Hcl缓冲液,有的用PBS,有的用蒸馏水的;而茜素红的浓度,有的用1%茜素红,有的用0.1%茜素红,给我弄得头大。我刚刚做成功,给大家分享一下。" _& n: Q  D% M1 l
成骨茜素红染色方法:8 }: n: y! P- g/ \7 W0 D
1、细胞用PBS 冲洗2-3遍;) H9 j5 m# P9 `7 N# {
2、 4%福尔马林固定15分钟;- Z! O8 \2 w9 n, D4 P8 g4 T8 Y
3、 PBS 冲洗1-2遍;
2 S/ ^6 h  u8 _# ~4 、加入0.1%茜素红,孵育10分钟;
8 g% u+ F1 p3 h$ a注:不要用1%的茜素红,孵育完毕后起染液好多去除不掉,为了试试这个浓度的,浪费了我一个培养板的细胞。刚配置好的溶液可以10分钟以上,放置一段时间以后的溶液就要时间短一些。时间不要过长,否则染液不易去除。当然跟室内温度也有一定的关系,温度越高,时间也短。
4 }5 q+ x7 U! ?5、 PBS洗涤细胞,尽量去除残余的染液;: o9 r" w# H- Z% g
6、 拍照
, f* B  k( Y2 {$ n* s" d, v9 ]' T6 x- z; v' I& M
0.1%茜素红的配制:
$ s- [) Y! I5 Q$ W  o' u1、首先配制0.1mol/l 的Tris-Hcl缓冲液:若配制100ml该溶液,先加入Tris base 1.211g,再缓慢加入盐酸使PH值达到7.5;
* N, r" f' F9 n& C2、称取0.1g茜素红加入到配制好的0.1mol/l 的Tris-Hcl缓冲液;% y) a5 ^* i. i) u% M
3、0.22um滤膜过滤备用。$ }- _* s9 @1 ~! G3 i7 i: G1 ~
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 20 + 30 原创内容

总评分: 威望 + 20  包包 + 30   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
0  
包包
64  
沙发
发表于 2012-3-9 08:50 |只看该作者
谢谢分享!
‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-5-30 00:16

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.