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这几天一直在弄干细胞成骨染色的实验,之前查了好多资料,就拿配制茜素红的溶液来说,有的用Tris-Hcl缓冲液,有的用PBS,有的用蒸馏水的;而茜素红的浓度,有的用1%茜素红,有的用0.1%茜素红,给我弄得头大。我刚刚做成功,给大家分享一下。" _& n: Q D% M1 l
成骨茜素红染色方法:8 }: n: y! P- g/ \7 W0 D
1、细胞用PBS 冲洗2-3遍;) H9 j5 m# P9 `7 N# {
2、 4%福尔马林固定15分钟;- Z! O8 \2 w9 n, D4 P8 g4 T8 Y
3、 PBS 冲洗1-2遍;
2 S/ ^6 h u8 _# ~4 、加入0.1%茜素红,孵育10分钟;
8 g% u+ F1 p3 h$ a注:不要用1%的茜素红,孵育完毕后起染液好多去除不掉,为了试试这个浓度的,浪费了我一个培养板的细胞。刚配置好的溶液可以10分钟以上,放置一段时间以后的溶液就要时间短一些。时间不要过长,否则染液不易去除。当然跟室内温度也有一定的关系,温度越高,时间也短。
4 }5 q+ x7 U! ?5、 PBS洗涤细胞,尽量去除残余的染液;: o9 r" w# H- Z% g
6、 拍照
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0.1%茜素红的配制:
$ s- [) Y! I5 Q$ W o' u1、首先配制0.1mol/l 的Tris-Hcl缓冲液:若配制100ml该溶液,先加入Tris base 1.211g,再缓慢加入盐酸使PH值达到7.5;
* N, r" f' F9 n& C2、称取0.1g茜素红加入到配制好的0.1mol/l 的Tris-Hcl缓冲液;% y) a5 ^* i. i) u% M
3、0.22um滤膜过滤备用。$ }- _* s9 @1 ~! G3 i7 i: G1 ~
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