干细胞成骨染色

wuyannini

这几天一直在弄干细胞成骨染色的实验，之前查了好多资料，就拿配制茜素红的溶液来说，有的用Tris-Hcl缓冲液，有的用PBS，有的用蒸馏水的；而茜素红的浓度，有的用1%茜素红，有的用0.1%茜素红，给我弄得头大。我刚刚做成功，给大家分享一下。" Y/ }& o# t" L6 I" Z
成骨茜素红染色方法：
0 u8 c; x3 M2 y1、细胞用PBS 冲洗2-3遍；
; D* H$ r' k: g& a7 }9 ]2、 4%福尔马林固定15分钟；8 O. M& M0 V- r, \. F, r7 x- o! H- G
3、 PBS 冲洗1-2遍；" F) q, t0 e/ q- g( n
4 、加入0.1%茜素红，孵育10分钟；
6 f6 P$ f2 `1 W& m5 W; _+ P注：不要用1%的茜素红，孵育完毕后起染液好多去除不掉，为了试试这个浓度的，浪费了我一个培养板的细胞。刚配置好的溶液可以10分钟以上，放置一段时间以后的溶液就要时间短一些。时间不要过长，否则染液不易去除。当然跟室内温度也有一定的关系，温度越高，时间也短。
7 n# U" Q# `3 ], T9 B# N5、 PBS洗涤细胞，尽量去除残余的染液；
. K3 m+ o( X# c6、 拍照
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' w/ [% D4 r1 k0 Y& d0.1%茜素红的配制：
7 ^8 m3 R% H" a0 V' l" _1、首先配制0.1mol/l 的Tris-Hcl缓冲液：若配制100ml该溶液，先加入Tris base 1.211g,再缓慢加入盐酸使PH值达到7.5；9 C' w& r0 n' e6 I6 x  ^: [! I
2、称取0.1g茜素红加入到配制好的0.1mol/l 的Tris-Hcl缓冲液；1 H& z$ [. R% J; G* ]5 [
3、0.22um滤膜过滤备用。1 b$ l/ }7 e* s$ h9 v

晶晶114

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