酶消化法分离培养脐带间充质干细胞

细胞干

最近摸索了一段时间，还没成功，有一些经验，但也有迷惑，蹦出来分享并求解：% @( E/ v- K9 p9 Q4 I
首先，洗净脐带，用剪开浆膜（最好从两根动脉之间），依次剔除两根动脉，静脉就不剔了，因为静脉壁很薄，跟周围胶体连接很紧。再用有齿镊提起胶体，顺脐带轴方向剪下细长条状，再将其剪成小块，最好1~3mm3
+ Y9 c9 d* u9 N+ x; t然后，消化前将组织块PBS洗两遍，0.1%胶原酶2消化4h，接着加0.25%胰酶消化30min。因为消化液很黏稠，加PBS稀释，过滤。
8 x. z* @- y9 h离心我是用的1500，10min，但是昨天做的感觉离心力不够，离心下来细胞不是很多。
( c2 u  h2 g+ E' J! b3 a求解：1. 消化液稀释后仍然很黏，是不是要加大转速或延长离心时间？以前试过3000,10min，但是有很多杂质。求合适的转速及时间！. z8 X5 E; G2 v7 h- \9 r
          2. 过滤的时候会不会胶原蛋白堵塞网孔，导致细胞滤不下去啊？有办法解决吗？
9 O9 Q. e( N7 L+ E0 `# p2 a8 o          3. 个人感觉胶原酶消化4h，还是有点短，请问当组织块消化到什么状态说明消化的差不多了。

细胞干

不会出现静脉细胞，只要剪下胶体，静脉留下来，3cm一段，胶体够用了