HUC-MSCs细胞培养状态怎么控制？

wangsandan0503

刚开始培养hUC-MSCs细胞，什么时候换液，是2天还是3天，师兄教诲说是2天换液，自我感觉如果2天换液的话，细胞状态不太好，3天换液细胞生长比较旺盛。可是我的细胞状态一直这样，不知道是好，还是坏？大家看一下
) Q1 U& R6 N  u% c) R细胞培养基里面总是有很多黑渣子。师兄说是细胞碎片，请各位指导。. A* }3 K% b. e' }% s
细胞传代的时候消化细胞的时候，离心速度时间应该是多少比较合适？总觉得自己的细胞传代之后状态很烂。  hUC-MSCs细胞是在10cmdish里面培养好呢  还是细胞培养瓶中好点 ？

sj842563

和我培养的很想，我感觉是消化的问题，有没有老前辈给解释一下啊

一一

可能有很多因素造成，但是结果一致，细胞不健康，所谓黑渣渣，就是细胞里的颗粒，是判断状态的一个形态指标，如颗粒度多，胞膜不清晰。胰酶，营养度，毒性都可能是原因，但是消化过度，细胞会黏连，打不散，而营养如能源，碳源，助于细胞贴壁，保持形态的因子等，不够或不稳定也可能是原因，有些具有细胞毒性的试剂，需要注意。但是具体什么原因，还需要你做实验，改变单一条件，比较找出原因，不同批次是否有差别，这都要通过反复实验。

pailishi

这个细胞状态很差了，0.05%胰酶消化2-3min，在10cmdish里面培养也可以很好，还有你的培养体系是什么呢？

wangsandan0503

回复 pailishi 的帖子5 @' U) q" B. X7 L5 X9 p# N
: S8 L5 V3 x* o/ R3 b
培养体系  我也不知道是什么  是德国进口的   具体什么也不清楚

金戈

1. 培养瓶也好 培养皿也好 都不是主要问题，二者都没有影响的。
# W8 Y* f/ n: L/ u1 }/ z- q2.换液一般3天就可以了。2天也不至于会生长不好。只是有些浪费血清和劳力。
; E& h" E+ N/ M2 }8 {% J% m. {3.从你的第一张照片看 是有漂浮不少死细胞，因而很可能是你传代过程中消化没控制好。
" E1 l. O; X+ X1 e1 h) `9 g- ~你没讲具体怎么操作也不好评价。注意一些细节就好。胰酶处理久了对细胞不好。

wind789

wangsandan0503 发表于 2012-3-13 09:38 ( R1 V1 i2 w6 _9 b9 _3 s( v
刚开始培养hUC-MSCs细胞，什么时候换液，是2天还是3天，师兄教诲说是2天换液，自我感觉如果2天换液的话，细 ...

, ]# e) C" o' C5 t, m' l9 ~% z; {) i第一张是贴壁第二天？第二张是贴壁第四天，满得过度了？
  Y( X  l' N& w& N/ N9 w和我用DMEM+FBS培养的状态很像。

wind789

wind789 发表于 2012-3-14 08:41
' Z. l1 i8 C1 W  q5 z第一张是贴壁第二天？第二张是贴壁第四天，满得过度了？
- p4 `9 P  U# `6 `6 p$ F和我用DMEM+FBS培养的状态很像。

, ?( R# S3 s8 O- v0 H+ [8 ?
想附上实验图2张，不知如何上传。望提示！

上帝帮我转运吧

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wangsandan0503

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对  你说的很对  和我的一样。您的联系方式？