HUC-MSCs细胞培养状态怎么控制？

wangsandan0503

刚开始培养hUC-MSCs细胞，什么时候换液，是2天还是3天，师兄教诲说是2天换液，自我感觉如果2天换液的话，细胞状态不太好，3天换液细胞生长比较旺盛。可是我的细胞状态一直这样，不知道是好，还是坏？大家看一下, \! B* X+ n! |- ^3 n
细胞培养基里面总是有很多黑渣子。师兄说是细胞碎片，请各位指导。+ j' o/ a2 C. V' B  C6 `5 F1 [
细胞传代的时候消化细胞的时候，离心速度时间应该是多少比较合适？总觉得自己的细胞传代之后状态很烂。  hUC-MSCs细胞是在10cmdish里面培养好呢  还是细胞培养瓶中好点 ？

sj842563

和我培养的很想，我感觉是消化的问题，有没有老前辈给解释一下啊

一一

可能有很多因素造成，但是结果一致，细胞不健康，所谓黑渣渣，就是细胞里的颗粒，是判断状态的一个形态指标，如颗粒度多，胞膜不清晰。胰酶，营养度，毒性都可能是原因，但是消化过度，细胞会黏连，打不散，而营养如能源，碳源，助于细胞贴壁，保持形态的因子等，不够或不稳定也可能是原因，有些具有细胞毒性的试剂，需要注意。但是具体什么原因，还需要你做实验，改变单一条件，比较找出原因，不同批次是否有差别，这都要通过反复实验。

pailishi

这个细胞状态很差了，0.05%胰酶消化2-3min，在10cmdish里面培养也可以很好，还有你的培养体系是什么呢？

wangsandan0503

回复 pailishi 的帖子: U# H7 G- l' b% x+ D! m5 p

9 P* V$ h5 Y0 |5 {: D培养体系  我也不知道是什么  是德国进口的   具体什么也不清楚

金戈

1. 培养瓶也好 培养皿也好 都不是主要问题，二者都没有影响的。. f. J* o5 I- t- q: P# o1 s/ X
2.换液一般3天就可以了。2天也不至于会生长不好。只是有些浪费血清和劳力。2 L4 L7 c8 e! c, N6 q) i6 B; a1 ]
3.从你的第一张照片看 是有漂浮不少死细胞，因而很可能是你传代过程中消化没控制好。
7 v  W% e; N% V你没讲具体怎么操作也不好评价。注意一些细节就好。胰酶处理久了对细胞不好。

wind789

wangsandan0503 发表于 2012-3-13 09:38 % J" L- N3 X1 B  A) x$ j! g5 y
刚开始培养hUC-MSCs细胞，什么时候换液，是2天还是3天，师兄教诲说是2天换液，自我感觉如果2天换液的话，细 ...

' g1 ~1 F7 h) I- X; L# ]第一张是贴壁第二天？第二张是贴壁第四天，满得过度了？
+ A: Q: D1 t* e. w  j和我用DMEM+FBS培养的状态很像。

wind789

wind789 发表于 2012-3-14 08:41 2 N/ Z2 H) a# V6 s0 G* Y- O
第一张是贴壁第二天？第二张是贴壁第四天，满得过度了？, |8 t) Z$ [- Q  v9 g9 P( P3 w
和我用DMEM+FBS培养的状态很像。

% ]9 H/ b, J6 t9 {0 h! `% ]) j
想附上实验图2张，不知如何上传。望提示！

上帝帮我转运吧

回复 wind789 的帖子. p( s+ k3 R6 T5 r, r

+ C# {7 d! h' g) q$ W( z采用高级模式    附件上传就可以了

wangsandan0503

: d8 F; R. m. P  K: \7 B

  c- a7 ^' r3 [- ]. g+ {& n3 t- N回复 wind789 的帖子
+ |3 i* e3 N& V3 f( Y. i/ ~7 [( e5 ~* n  Z$ }0 [7 a
对  你说的很对  和我的一样。您的联系方式？