求教！关于小鼠iPS培养基配方的问题！

ligangtiancai

RT，小弟在培养miPS中发现视野中细胞碎片较多，且在传代后3天内就有大量的分化，不知道是配方的问题还是MEF的问题。小弟培养基配方是：高糖DMEM210ml（Hyclone）+FBS 25ml（Hyclone）+NEAA 2.5ml +L-Glu 2.5ml+2-ME 0.25ml+LIF 1000U/ml MEF是自己分的昆明鼠。
( x! e! Q: g5 A0 F( h# j: E请教高人：3 x/ x0 n7 I1 w- `' ]
1.有成功经验的培养基配方
* Y' f3 W. d9 H+ d0 ^2.胰酶的选择（是否+EDTA？牌子？）
' m  s4 t' C4 g+ I% G* S1 J* C3.传代周期？
0 \5 |0 c6 s& T! n4.MEF的选择？（KM MEF是否可以）9 N: i7 |; C: m
5.求几张不错的miPS的图片参考一下。
+ s. R0 B, e; r! H+ g; U% J9 p9 K        感激不尽，先行谢过！

ligangtiancai

求教高人啊！

mohanmud

1 A& O6 E3 C$ \. O
1.有成功经验的培养基配方
$ b3 k3 }* Y7 f1 ZKnock-out DMEM+20% ES-FBS+1%NEAA+1% L-Glu+0.1mM 2-ME+LIF 1000U/ml
; v: V2 @( P4 R2 q% b1 u8 J! Z/ e0 A0 N& a# ?% V5 [
2.胰酶的选择（是否+EDTA？牌子？）+ A* o* u5 {; r0 t, [( z9 j
0.05% trypsin+EDTA
8 A5 A0 s1 p6 T" }3.传代周期？  2 S& G# {, s0 H9 o
Around  48 hours# D& z$ z+ D; M0 X- h) H1 w9 S" \3 {
4.MEF的选择？（KM MEF是否可以）/ r1 r! S! h, o9 n; T# C
MEF from CF1 mouse is most used，no experience using KM MEF! ^# k( V3 r  n8 ^) s% S& [+ }  h

6 a" Y' o6 Z% ]: S+ c5.求几张不错的miPS的图片参考一下。( t, d( q9 G, D' ]! F

; F; }1 ]; w! k4 N2 z4 qYou can find plenty in literature.
9 {+ g; ~; R- [  [& }5 P9 l$ T$ P/ m0 {" w6 ?. l

ligangtiancai

回复 mohanmud 的帖子4 o  l0 v$ W1 S
1 S4 o6 `$ \! v% w7 R  X" {; p
谢谢，不过文献上miPSC不是多数用的是C57的MEF么？CF-1的是不是多用于人？再就是这里的ES qualified FBS和我所用的Hyclone FBS相比优势在哪、、因为我刚买了500ml的血清，不知是不是就不能用了 必须用ES qualified的，望不吝赐教，谢谢！

mohanmud

回复 ligangtiancai 的帖子
8 \+ \) ?' E& ^3 V0 n! d( X, Q- |" H' N2 I- a4 x3 O- {
I did not compare the difference between C57 and CF-1 MEF,  but CF-1 MEF works fine for me in both human and murine ES/iPS cells.5 o2 s8 m3 O, V( m
4 g/ P( X+ H. P! N
Regarding to FBS
+ r9 G/ w$ E5 X2 W/ v8 bCheck this: ) V; j2 i: }: |2 ~% c
http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Embryonic-Stem-Cells/ESC-Stem-Cell-Culture-Media-Reagents/es-cell-qualified-fbs.html

ligangtiancai

回复 mohanmud 的帖子
/ E% z* [" q+ i- ^
: o! N  [  V8 q" W好的  谢谢！再就是请问一下LIF能否直接加到配好的培养基中，我现在是每次换液的时候现加的，老师说是长时间加在培养基中LIF效价会降低，不知你是否有这方面经验，谢谢！

抹了个茶

我的lif都是加在配好的培养液中的2 T8 `6 `/ C: i# n8 B. j- }1 o

抹了个茶

对了 我现在是用2i体系的

ligangtiancai

LIF直接加到培养基中？不用每次换液都再加么？还有  不好意思请问2i体系是什么。。谢谢！

抹了个茶

现在小鼠的ips为了维持self-renewal和多能性有两种培养体系 一种是bmp加lif的  或者说是血清加lif 另外的是2i加lif这种 2i是指erk通路和GSK通路抑制剂