求教！关于小鼠iPS培养基配方的问题！

ligangtiancai

RT，小弟在培养miPS中发现视野中细胞碎片较多，且在传代后3天内就有大量的分化，不知道是配方的问题还是MEF的问题。小弟培养基配方是：高糖DMEM210ml（Hyclone）+FBS 25ml（Hyclone）+NEAA 2.5ml +L-Glu 2.5ml+2-ME 0.25ml+LIF 1000U/ml MEF是自己分的昆明鼠。! O3 L2 S; U" n8 e5 C, M% P
请教高人：
# j% {4 i1 a& U& p, C$ Y1.有成功经验的培养基配方
$ j! F* k' D/ \9 `  ~0 s2 X2.胰酶的选择（是否+EDTA？牌子？）
1 K( G; ]9 x: \3.传代周期？0 W) ]% T7 g" V
4.MEF的选择？（KM MEF是否可以）5 B) q/ M0 \" C: T2 I
5.求几张不错的miPS的图片参考一下。, V8 |; s$ g- Q/ H+ @$ k7 t( D
        感激不尽，先行谢过！

ligangtiancai

求教高人啊！

mohanmud

6 J5 K/ v! R( d5 E) M
1.有成功经验的培养基配方
9 \5 F1 J0 @$ B. Z8 |9 dKnock-out DMEM+20% ES-FBS+1%NEAA+1% L-Glu+0.1mM 2-ME+LIF 1000U/ml
( t5 l3 z5 G; q) D* L8 i6 s- x( c( z* F0 E
2.胰酶的选择（是否+EDTA？牌子？）
! B5 O5 K/ |, D, x  D" r0.05% trypsin+EDTA
: @' p8 O) D& O3.传代周期？  
8 n0 c* Z" n( J3 O5 G$ iAround  48 hours
9 z5 m5 s- O* F, a" y* A4.MEF的选择？（KM MEF是否可以）6 e0 v, D1 g/ F
MEF from CF1 mouse is most used，no experience using KM MEF
9 \2 L1 t$ S# R, ]# S. J  x& _/ b& X& K
5.求几张不错的miPS的图片参考一下。
2 n) ~! F6 j! U" P- Q
2 C( I# G& p# d$ o5 V# NYou can find plenty in literature.
. p5 N4 W6 b# _. j2 z# K% }
) c4 I! S7 y/ r5 N' D1 C

ligangtiancai

回复 mohanmud 的帖子
; Z& s3 T0 c2 c. L! l0 Y" g! f3 ?; y, Y4 W* b
谢谢，不过文献上miPSC不是多数用的是C57的MEF么？CF-1的是不是多用于人？再就是这里的ES qualified FBS和我所用的Hyclone FBS相比优势在哪、、因为我刚买了500ml的血清，不知是不是就不能用了 必须用ES qualified的，望不吝赐教，谢谢！

mohanmud

回复 ligangtiancai 的帖子. ~( l, Z) ~0 t. A. X
  [8 W+ {, r. S7 ]
I did not compare the difference between C57 and CF-1 MEF,  but CF-1 MEF works fine for me in both human and murine ES/iPS cells.
: V: U' F/ [& m$ t& C
/ k' ]8 |) X! G9 H* t9 d. Q7 }Regarding to FBS1 h3 Z7 J8 |% Z1 j
Check this: 8 I/ l% j- I7 q4 ]
http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Embryonic-Stem-Cells/ESC-Stem-Cell-Culture-Media-Reagents/es-cell-qualified-fbs.html

ligangtiancai

回复 mohanmud 的帖子
+ B) p0 G$ K3 G4 X, c2 x: J* q
2 f# @/ p  a9 E& z好的  谢谢！再就是请问一下LIF能否直接加到配好的培养基中，我现在是每次换液的时候现加的，老师说是长时间加在培养基中LIF效价会降低，不知你是否有这方面经验，谢谢！

抹了个茶

我的lif都是加在配好的培养液中的
' n( l+ u) ^" `& P2 L' s  W

抹了个茶

对了 我现在是用2i体系的

ligangtiancai

LIF直接加到培养基中？不用每次换液都再加么？还有  不好意思请问2i体系是什么。。谢谢！

抹了个茶

现在小鼠的ips为了维持self-renewal和多能性有两种培养体系 一种是bmp加lif的  或者说是血清加lif 另外的是2i加lif这种 2i是指erk通路和GSK通路抑制剂