细胞老化的问题

yanlu98

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( U- M- i; ?# e1 \% u我养的脐带间充干细胞是用酶消化法处理的，现在养到第二代，就有的出现了老化的现象，细胞出现了好多小黑点，还成菊花样生长，一簇一簇的，培养基倒出后肉眼就可以看到皿底有很多小点点，就是镜下看到的小簇细胞，而且这些小簇等到消化的时候在镜下看也会回缩，我感觉还是细胞，等到传到新的皿后，不久又出现了。细胞不是很多时也会出现，如果细胞长得多了，消化时细胞就会像一层白膜一样脱落下来，而且很难吹开。我用的培养基是GIBCO的DMEM,血清也是GIBCO的优级FBS（澳洲源），我现在养的方法是以前师姐用的方法，FBS加2%，但是我看很多文献都是4%，会不会是血清的问题呢？但是我以前养的也没有出现这样的情况啊，希望大家能帮我分析一下！谢谢！
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Demon_CN

没加贴壁因子吧，细胞光长不往走遍爬了吧。

hello2134

细胞接种的时候不均匀，建议吹打均匀后再种板，另外传代比例可以1传3或1传4，就不会出现这种想象了。同时，注意及时传代，3-4天传一代，传代晚了的话也会出现上面情况。

wangsandan0503

: L$ |' _- s2 P  e) _

, {# B* ?9 u( X) m2 A/ j细胞传代的时候没有吹打匀，而且细胞铺的不均匀。

上帝帮我转运吧

我的也是这个问题
7 S+ Z9 k* Z/ W0 shttp://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid599398不是吹散的问题，那些小点点会慢慢变多，求经验呢！

lingminliang

有可能是你酶消化时间过长了，细胞成团粘连，你吹的时候又没充分吹散，所以才会造成细胞分布不均

喇叭shopping

消化传代吧，细胞太密会使细胞老化加快。建议接种时细胞吹散，低密度接种。

wind789

, u: K* P$ V* o

yanlu98 发表于 2012-3-19 16:45
5 k2 {- h' E% j回复 wangsandan0503 的帖子

8 L9 w0 r# L0 {' _) i

- Y. ~0 F/ q& T$ P( B/ N$ {* ^/ I  \感觉是消化时细胞成片成白膜下来，没有吹散就接种了。你细胞的状态还可以啊。

cactus006

回复 yanlu98 的帖子
9 ?; b; p1 j2 t7 Z8 r
% y% \, i! d5 G& E0 R* M8 l看样子是细胞没有及时传代，然后聚集成团；消化的时候整个细胞球没有消化开，接种到新的培养瓶中就会成簇生长，建议接种密度稍微低一些，接种时吹打成单细胞悬液试试

hwlightning

1、细胞密度没处理好，其它地方细胞少，成片状的细胞太多，没有混匀。
" n  f/ m5 b, P0 r- ?2、细胞养的时间太长，细胞太密集了。/ |$ K  o! M3 x' |. c, z4 Z