细胞老化的问题

yanlu98

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我养的脐带间充干细胞是用酶消化法处理的，现在养到第二代，就有的出现了老化的现象，细胞出现了好多小黑点，还成菊花样生长，一簇一簇的，培养基倒出后肉眼就可以看到皿底有很多小点点，就是镜下看到的小簇细胞，而且这些小簇等到消化的时候在镜下看也会回缩，我感觉还是细胞，等到传到新的皿后，不久又出现了。细胞不是很多时也会出现，如果细胞长得多了，消化时细胞就会像一层白膜一样脱落下来，而且很难吹开。我用的培养基是GIBCO的DMEM,血清也是GIBCO的优级FBS（澳洲源），我现在养的方法是以前师姐用的方法，FBS加2%，但是我看很多文献都是4%，会不会是血清的问题呢？但是我以前养的也没有出现这样的情况啊，希望大家能帮我分析一下！谢谢！
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wangsandan0503

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我也出现同样的问题啊 。小黑点，应该是细胞碎片。不用在意，上次咨询老师，老师说可能是污染，然后我让他在显微镜下看了一下他说正常，你可以上传你的细胞照片，共同分析一下。

yanlu98

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' B; N. Y, @+ O: x就像这样，周围的细胞也不是特别密，就形成簇状了，郁闷！你的也是这样吗？

hanbing

看你这细胞的状态还算可以啦，这个细胞就是越长越大，越来越宽，我样的细胞就没超过p20

receiver1

应该不是血清的问题，血清少了的话，造成血清饥饿，细胞状态会不好。显然你的细胞状态还行。我也遇到过这种情况。我怀疑细胞不纯，杂细胞产生了某种因子导致细胞聚集。重新做一次吧

cneagle66

感觉细胞传代的时候没有分散成单细胞，这样的话，其他地方稀稀落落，而有细胞的地方已经成团。

hwlightning

1、细胞密度没处理好，其它地方细胞少，成片状的细胞太多，没有混匀。
5 j/ w0 A7 b7 u0 Z" L2、细胞养的时间太长，细胞太密集了。
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cactus006

回复 yanlu98 的帖子8 L) {- Q5 \5 w* G6 Y4 t
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看样子是细胞没有及时传代，然后聚集成团；消化的时候整个细胞球没有消化开，接种到新的培养瓶中就会成簇生长，建议接种密度稍微低一些，接种时吹打成单细胞悬液试试

wind789

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yanlu98 发表于 2012-3-19 16:45
% g* I  C* z" C8 m3 i/ \4 ^( z8 @回复 wangsandan0503 的帖子

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3 w& v8 {; G& W5 T7 C. d+ y感觉是消化时细胞成片成白膜下来，没有吹散就接种了。你细胞的状态还可以啊。

喇叭shopping

消化传代吧，细胞太密会使细胞老化加快。建议接种时细胞吹散，低密度接种。