请教一个问题 为什么基因打靶要用雄性ES细胞系

ying

前几天听了个讲座，貌似确实有此一说。他的解释我忘记了～那个讲座是个中国的做敲除的公司的技术人员，应该讲的靠谱吧。

jefferson

. a1 G7 h/ I4 D/ |* L* j+ @; f$ q  z* i5 V+ o5 t1 }' t
请问LZ这本是什么书？/ z" A2 H6 O" l) x5 o) S4 r3 ~
0 s% e- A; U, A: X
来源雌性的ES细胞系，在某些方面确实比来源雄性的不稳定些。9 w- M$ j- y4 _/ M
% ~7 `. M3 F8 m5 W
在遗传稳定性上，有报道说ES细胞在长期培养过程中发生的获得性变异多发生在12, 17和X染色体上；' S# s, d  y: k$ n
在表观遗传稳定性上，来自雌性的ES细胞在X染色体失活方面有着不同的差异，有报道在一些来自女性的ES细胞系中，没有观察到X染色体的失活。从这点上来说，来自雌性的ES细胞，表观遗传稳定性还是有差异的。7 I" D! Z- r9 B* W/ M3 r0 }
, u- g! p4 S2 S8 s6 M6 `; T! Y. e
因此虽然一般的基因打靶不会靶入到性染色体上，但相比雄性来源ES细胞系，雌性相比而言确实稳定性稍差。
  x* `) U4 J1 [: I$ y) S# w& {6 E4 P3 R# E
不过这几年，做干细胞打靶的研究越来越多，但从没看到过说只能打雄性干细胞的说法。大概搜了几篇PAPER, 都用到了女性的ES做的打靶。
$ c3 D: Q* y1 B5 J) c6 j, A+ f2 A4 M8 K0 d1 W+ \* E6 l
1. Gene targeting of a disease-related gene in human induced pluripotent stem and embryonic stem cells. Cell Stem Cell. 2009 Jul 2;5(1):97-110. Epub 2009 Jun 18. 用的是H1 (Male) 和H9 （Female） 细胞；3 e" A& g2 a- L6 Y$ q
2. Generation of platform human embryonic stem cell lines that allow efficient targeting at a predetermined genomic location. Stem Cells Dev. 2009 Dec;18(10):1459-72. 用的是H9 （Female）细胞；$ h5 x; Z+ a) h
3. Highly efficient transient gene expression and gene targeting in primate embryonic stem cells with helper-dependent adenoviral vectors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 September 16; 105(37): 13781–13786. 用的是KhES-1（Female）和KhES-3(Male)细胞。
, ?* q: a2 D7 B; e7 r' ]" u  ~. R; t8 P9 L& p/ M, H% S
因此，个人觉得，LZ书上的这个说法，是否有问题？

sarah19860420

回复 懵懂干细胞 的帖子8 ^: k8 M' a- Q. X* }! L

( |5 Z& Y+ y( n1 T/ @! _% W! ?恩，是的

lifeida

用雄性的主要是后代好交配，获得纯合个体，如小鼠上敲除了公鼠的a-半乳糖苷酶，通过杂交、回交就可以较快的获得纯合体。

懵懂干细胞

回复 xiaojunhu1985 的帖子
! q1 k, H9 {; Q3 D9 h# J! m/ e! v/ N5 {3 c; q. V: ]
雄性ES细胞为什么遗传特性稳定啊？ 雌雄不可以重复利用？

懵懂干细胞

回复 sarah19860420 的帖子
* D0 L4 _# N; Z
! `$ p  u. T# ?' w- o2 z当敲除的是X染色体上的基因才符合这种情况，但一般都不是敲除X染色体上的基因的，敲X染色体上的话还要进一步讨论

xiaojunhu1985

这种回答应该都有问题。其根本原因一、由于雄性ES细胞，遗传特性稳定，二、外源基因一旦整合到基因组，进入生殖系，公鼠交配可以重复利用，在下一代中更容易得到敲除小鼠，。

sarah19860420

选择雄性的ES细胞系，只需要敲除一次就可以得到纯的KNOCK OUT 的细胞。而雌性的是有2个X染色体，即使敲除一个，也还是杂合体，我是这样认为的

懵懂干细胞

我想到的只有两点，一个是可以对Y染色体进行敲除；另一个是可以避免由失活的X染色体甲基化状态改变等带来的负面影响。