请教一个问题 为什么基因打靶要用雄性ES细胞系

懵懂干细胞

麻烦那位高手能解释一下吗？+ P- F8 l; L/ t* E

  A! ^' k( q! a, v谢谢了

懵懂干细胞

我想到的只有两点，一个是可以对Y染色体进行敲除；另一个是可以避免由失活的X染色体甲基化状态改变等带来的负面影响。

sarah19860420

选择雄性的ES细胞系，只需要敲除一次就可以得到纯的KNOCK OUT 的细胞。而雌性的是有2个X染色体，即使敲除一个，也还是杂合体，我是这样认为的

xiaojunhu1985

这种回答应该都有问题。其根本原因一、由于雄性ES细胞，遗传特性稳定，二、外源基因一旦整合到基因组，进入生殖系，公鼠交配可以重复利用，在下一代中更容易得到敲除小鼠，。

懵懂干细胞

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1 V* J# I$ n* [* r$ D: ]# z& ^# i; U. X9 g6 G1 E
当敲除的是X染色体上的基因才符合这种情况，但一般都不是敲除X染色体上的基因的，敲X染色体上的话还要进一步讨论

懵懂干细胞

回复 xiaojunhu1985 的帖子) H7 X  n. J% P9 y: a  a3 v0 @
5 u* q( V& v5 q7 i
雄性ES细胞为什么遗传特性稳定啊？ 雌雄不可以重复利用？

lifeida

用雄性的主要是后代好交配，获得纯合个体，如小鼠上敲除了公鼠的a-半乳糖苷酶，通过杂交、回交就可以较快的获得纯合体。

sarah19860420

回复 懵懂干细胞 的帖子6 w* I  e$ k+ ~0 C

5 y, a# s; _6 }5 L恩，是的

jefferson

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: t3 n+ f2 C/ H/ N- n& y2 `" G" {: v$ u请问LZ这本是什么书？; k, T4 Y& M& S" ], z+ `
9 A; d0 ~& x* d; N" r
来源雌性的ES细胞系，在某些方面确实比来源雄性的不稳定些。
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在遗传稳定性上，有报道说ES细胞在长期培养过程中发生的获得性变异多发生在12, 17和X染色体上；
$ g7 d% d: Y0 \8 y6 x在表观遗传稳定性上，来自雌性的ES细胞在X染色体失活方面有着不同的差异，有报道在一些来自女性的ES细胞系中，没有观察到X染色体的失活。从这点上来说，来自雌性的ES细胞，表观遗传稳定性还是有差异的。
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因此虽然一般的基因打靶不会靶入到性染色体上，但相比雄性来源ES细胞系，雌性相比而言确实稳定性稍差。
( R. z" u4 `& c# J; F$ D8 R* K6 M
不过这几年，做干细胞打靶的研究越来越多，但从没看到过说只能打雄性干细胞的说法。大概搜了几篇PAPER, 都用到了女性的ES做的打靶。
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1. Gene targeting of a disease-related gene in human induced pluripotent stem and embryonic stem cells. Cell Stem Cell. 2009 Jul 2;5(1):97-110. Epub 2009 Jun 18. 用的是H1 (Male) 和H9 （Female） 细胞；
% A# N( x; m( S7 P, k1 ?2 ?2. Generation of platform human embryonic stem cell lines that allow efficient targeting at a predetermined genomic location. Stem Cells Dev. 2009 Dec;18(10):1459-72. 用的是H9 （Female）细胞；
6 C7 b2 a& n. Z1 x' J( s3. Highly efficient transient gene expression and gene targeting in primate embryonic stem cells with helper-dependent adenoviral vectors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 September 16; 105(37): 13781–13786. 用的是KhES-1（Female）和KhES-3(Male)细胞。
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因此，个人觉得，LZ书上的这个说法，是否有问题？

ying

前几天听了个讲座，貌似确实有此一说。他的解释我忘记了～那个讲座是个中国的做敲除的公司的技术人员，应该讲的靠谱吧。