请教一个问题 为什么基因打靶要用雄性ES细胞系

懵懂干细胞

麻烦那位高手能解释一下吗？# U: M1 n- x/ P3 J3 c" X

) o1 p9 U1 u6 ~& T谢谢了

懵懂干细胞

我想到的只有两点，一个是可以对Y染色体进行敲除；另一个是可以避免由失活的X染色体甲基化状态改变等带来的负面影响。

sarah19860420

选择雄性的ES细胞系，只需要敲除一次就可以得到纯的KNOCK OUT 的细胞。而雌性的是有2个X染色体，即使敲除一个，也还是杂合体，我是这样认为的

xiaojunhu1985

这种回答应该都有问题。其根本原因一、由于雄性ES细胞，遗传特性稳定，二、外源基因一旦整合到基因组，进入生殖系，公鼠交配可以重复利用，在下一代中更容易得到敲除小鼠，。

懵懂干细胞

回复 sarah19860420 的帖子3 q# l3 }' t) x! L6 v4 |8 ]' ^
6 N& f9 U2 M: P$ u
当敲除的是X染色体上的基因才符合这种情况，但一般都不是敲除X染色体上的基因的，敲X染色体上的话还要进一步讨论

懵懂干细胞

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* ^$ X" \+ T8 j' a( R$ H, p2 N. k* `
雄性ES细胞为什么遗传特性稳定啊？ 雌雄不可以重复利用？

lifeida

用雄性的主要是后代好交配，获得纯合个体，如小鼠上敲除了公鼠的a-半乳糖苷酶，通过杂交、回交就可以较快的获得纯合体。

sarah19860420

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: n; Y! t) c; @7 y; m( H
9 j. l, H2 K# u- b恩，是的

jefferson

6 c- @8 j1 }$ g. T
- ?% C0 u7 V' Y7 x3 M
请问LZ这本是什么书？$ J2 E2 X( o/ q9 B

5 w0 `; X! e1 t3 M! T/ I  E+ f来源雌性的ES细胞系，在某些方面确实比来源雄性的不稳定些。0 q) Z) F' u+ [- U5 J( n4 P9 D/ c

' B$ \+ L+ x7 G( h/ g在遗传稳定性上，有报道说ES细胞在长期培养过程中发生的获得性变异多发生在12, 17和X染色体上；7 @( G2 U4 M6 g) E' D- Y9 K* e: l+ d
在表观遗传稳定性上，来自雌性的ES细胞在X染色体失活方面有着不同的差异，有报道在一些来自女性的ES细胞系中，没有观察到X染色体的失活。从这点上来说，来自雌性的ES细胞，表观遗传稳定性还是有差异的。
3 f8 a$ N8 t1 L4 X
7 F) l7 S& R8 f因此虽然一般的基因打靶不会靶入到性染色体上，但相比雄性来源ES细胞系，雌性相比而言确实稳定性稍差。- h5 Q. t# ~7 W! L) l

- H8 L, P1 u6 V, R) D不过这几年，做干细胞打靶的研究越来越多，但从没看到过说只能打雄性干细胞的说法。大概搜了几篇PAPER, 都用到了女性的ES做的打靶。7 s! k, }5 W, g& E
# N: i7 {4 J5 H% M1 i5 C
1. Gene targeting of a disease-related gene in human induced pluripotent stem and embryonic stem cells. Cell Stem Cell. 2009 Jul 2;5(1):97-110. Epub 2009 Jun 18. 用的是H1 (Male) 和H9 （Female） 细胞；' N+ c  l3 Q! g# J
2. Generation of platform human embryonic stem cell lines that allow efficient targeting at a predetermined genomic location. Stem Cells Dev. 2009 Dec;18(10):1459-72. 用的是H9 （Female）细胞；
! u* D+ o: f  ^7 y, c7 l, z3. Highly efficient transient gene expression and gene targeting in primate embryonic stem cells with helper-dependent adenoviral vectors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 September 16; 105(37): 13781–13786. 用的是KhES-1（Female）和KhES-3(Male)细胞。( B3 K8 t, ~/ x: K3 g
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因此，个人觉得，LZ书上的这个说法，是否有问题？

ying

前几天听了个讲座，貌似确实有此一说。他的解释我忘记了～那个讲座是个中国的做敲除的公司的技术人员，应该讲的靠谱吧。