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楼主: 懵懂干细胞
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请教一个问题 为什么基因打靶要用雄性ES细胞系   [复制链接]

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优秀会员 金话筒 专家

11楼
发表于 2012-3-31 22:04 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
这个太容易解释了,你自己想象一下操作过程就知道( o% {/ [+ b+ c# x" I5 ?
敲除的限制步骤是germline transmission3 r7 h& N' b3 X
说到底,这就是茶壶和茶杯的关系
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12楼
发表于 2012-8-17 14:51 |只看该作者
回复 懵懂干细胞 的帖子
  p* z( r* Q# t3 R% v1 g1 k$ m; s* ^
1 d) V" e6 G1 X* a1 K7 j: ]0 l雄性的小鼠一旦出现嵌合鼠了,可以和很多母鼠交配,F1代比较容易出现
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金话筒 优秀版主

13楼
发表于 2012-8-17 18:53 |只看该作者
因为那个时代转基因动物的出生所使用的是嵌合的办法,嵌合动物的出生雄性概率和存活率都很高,但是克隆和四倍体嵌合技术较为完善的话,也可用xx的细胞系
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14楼
发表于 2012-12-17 14:40 |只看该作者
刚开始接触 干细胞,对 germline transmission 实在是不太理解。
* n7 ]. o/ S+ T! v/ p# w我现在刚开始做 gene targetting,,现在筛选 ES 阳性克隆。
; I$ y* a/ m5 k3 [$ U0 u7 T1 [2 O0 q3 f1 d" f9 q1 D
germline transmission 的理解,实在是没有概念,。,。
2 L$ B) _; b5 Z1 `! N( ~- W$ E望大侠 指教!!!

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15楼
发表于 2012-12-17 14:41 |只看该作者
回复 cicadacjk 的帖子
6 e  T  J2 @9 p2 h' e2 I% u8 M" ?2 W- g: d, c6 b% X
刚开始接触 干细胞,对 germline transmission 实在是不太理解。
" P% a& R0 Z4 J1 E. P* u我现在刚开始做 gene targetting,,现在筛选 ES 阳性克隆。; Q" p/ [9 s5 i0 `
. {! ~  s  M: p! p1 C# P% E0 l
germline transmission 的理解,实在是没有概念,。,。
; c2 z) k' i- S6 \- T1 \( e望大侠 指教!!!
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小小研究员

16楼
发表于 2012-12-18 11:25 |只看该作者
回复 colindream 的帖子
3 Y- L' X/ ~7 X( E9 G0 F9 h7 y, R; K$ C, _1 {/ y: T; }
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17楼
发表于 2013-7-3 10:59 |只看该作者
长期以来做基因打靶一直接在小鼠等动物水平,而打靶效率很不一致,很少情况下能得到一个等位基因打靶的细胞系,所以通常的做法是将一个等位基因打靶的细胞系(ES)培育成小鼠,然后将其与正常(通常带有重组酶)异性交配,有1/4概率得到两个等位基因打靶的纯合子后代; 如果起始用的一个等位基因打靶的细胞系(ES)是母的,一次交配只能产生一窝;如果是公的,你想想可以多少窝,这样可以保证拿到或拿到更多纯合子,这就是germline transmission.
! w( M- r) m  y7 u1 _3 Y' J+ \但是随着打靶技术的发展,在人等高等动物细胞水平也可以实现打靶后, 伦理上你不能培养克隆人,不存在利用germline transmission产生纯合子的可能性;所以用XY的XX的(如果不存在什么易于同源重组的说法,这个还真不了解)都一样了,可以看到文献中有用H1也有用H9或其它人的ES细胞系.
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18楼
发表于 2013-7-3 11:14 |只看该作者
应用雄性的比较好吧,建系成功如果想对y染色体进行基因修饰,用雌性岂不是不能处理?
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19楼
发表于 2013-7-24 15:37 |只看该作者
还是看你打靶的基因在哪吧,但好像说雄性细胞基因稳定遗传性较好* r2 m1 F0 L$ w
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