请教酶消化法培养脐带间充质干细胞的问题

yingjie

这个说不定的，根据你胰酶和胶原酶浓度和消化时间不应该是消化过度的问题，如果你的消化酶没什么问题的话，就查查你的培养基有没有问题，用的是DMEM/F12培养基吗?还有你培养基中加了些什么,一般10%FBS,双抗100单位/ml,谷氨酰胺1%,还有碳酸氢钠.也不知道你是怎么操作的,很难说,能说下你的做细胞过程吗

yingjie

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  {7 @1 Y( P4 q; E( m- o- I
4 t9 T  v, ]* a0 K5 h' k7 a2 T 大部分都差不多，就是在消化上有点不同，这是我的做法
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Wharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的
! S! l5 j% v: g小烧杯中，置于37度恒温培养箱中消化4-6h
. z4 v1 t# A+ B6 G. T7 N- g    加入适当体积的PBSA（PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白，即BSA），一般是
# m& p2 M4 @) M2 D5 q胶原酶溶液体积的2倍，250g离心5分钟。1 C. Y1 I! S) g3 D( w, O3 u2 \
    弃上清液，加入2.5%胰蛋白酶（大约是沉淀物体积的2倍），37度处理30
/ z5 O; u* P  |  E- H分钟，轻轻摇动。, M' \* }( U. u9 I3 W
    加入适当体积的FBS（消化酶体积的10%）中止消化。# e3 V, z! S. y) W% y
    1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次.
1 T. u* m- O5 ?7 b1 M    用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少, Q, A( `3 y% B3 D
许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在+ k& D1 y% T; F  E3 a! r( H# r
1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养., Z+ ?& _4 _) w7 |4 }0 b0 @1 t4 C0 ]
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     我想，你在消化上应该在胶原酶消化完了之后最好先终止消化离心，再加入胰酶消化，还有就是消化完组织后，要清洗细胞，这个很重要，把残留的胰酶清洗掉9 ?# t  ~8 P, h# k: K