有诱导过EMT的经验人士吗？能不能讨论一下，

markllq

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: F+ R. H  ^6 Y  K3 H看什么时候撤。早期撤会回去的，过了某个点之后再撤就回不去了。至于原因不是很清楚。我个人认为前期表观遗传改变不稳定，可能是早期只发生了一些乙酰化水平的改变，而到后期就变的比较稳定，可能是组蛋白甲基化都发生了改变。

markllq

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6 Z9 x8 k/ k2 `% z9 j" q细胞培养的时候千万不要加血清，当你加tgfb开始诱导的时候再加，这株细胞诱导EMT很低效，我觉得最需要注意的就是细胞密度，要让细胞保持一种松散的状态，一旦感觉到细胞有点紧密了那就赶紧分。所以我们一般隔天就分一次，这样大概七八天左右就能看到明显形变，继续诱导到大约14天的时候可以收样。不要让密度超过70%，细胞太密你加tgfb时间再长都可能看不到形变。

markllq

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0 b. S" ?* d1 O$ _. Z7 i6 ]8 N9 a7 {, x是的，保证密度较稀，不能等到长密了再分

markllq

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) S4 s8 Z) A$ N9 e6 Q) F2 t& L8 B$ I3 g3 D
这些你去查weinberg的paper吧，里面写的很清楚。你铺的再稀，细胞是聚团生长的，只要聚团了就对EMT不利，传代是必须的。

markllq

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: t* L9 d+ Z% b
0 B2 Q4 V$ N( G; o我们用的是5%的血清，血清里面本来就含有tgfb，所以可能会发生EMT，没有关系，这很正常。weinberg实验室是通过磁珠将EMT的细胞去掉。没有磁珠也可以通过消化时mesenchymal和epithelial消化的时间不同去掉mesenchymal。

markllq

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! D- H$ G; L( M3 u; b) }/ \当然是上皮更难消化啊，因为表达E-cadherin等黏附蛋白。细胞培养基配方见附件，我们是自己配的培养基。