有诱导过EMT的经验人士吗？能不能讨论一下，

markllq

+ z9 [8 s% ?. C8 @' s
   一直在建EMT model，已经三四个月了，几乎没有什么进展，尝试过几种不同类型的epithelial细胞系。最开始用的是HT29细胞，通过过表达snail诱导，real-time和western检测的结果都显示snail表达量非常高，但是很奇怪，细胞一直看不出明显的形变，检测E-cadherin的mRNA水平和蛋白水平都没有差异。; o/ v, \! T8 Q% N+ c1 A6 g
   后来我们向weinberg实验室借了一株永生化的HMLE（immortalized human mammary- d! z3 O) c! }$ n7 f5 _& [
epithelial cells）细胞系，这个属于正常细胞系，研究起来更容易。我们尝试用snail，twist以及tgfb三种方式诱导，从weinberg以前的paper来看，诱导一段时间后细胞会从紧密的上皮样变成松散，并且形状很长的细胞，但我们按照paper里面的方法诱导一段时间后（已经是第9天了），还是没有看到明显的形态变化。
8 }- U0 Z2 d1 D    weinberg的paper里面关于EMT诱导的细节其实写的并不是很清楚，所以我担心是不是忽视了一些很重要的细节问题。比如血清的问题，这株细胞培养时是不能加血清的，诱导EMT的过程没有血清会不会有影响？另外，感染完细胞以后能不能继续用上皮细胞的培养基培养，还是需要换成其他的培养基？2 Q( W7 g9 v4 k! v+ R9 v

  P2 s! u7 {6 n) A, R" L- f/ [恳请有EMT经验的同胞指点，不胜感激！
% M2 e+ j. V7 y" V4 b$ T1 G$ b- ^4 [6 K: k

胡问成

回复 markllq 的帖子2 D+ Q' R3 A/ q6 A$ ^9 [$ H- T  ^

- D* x! D  H* u8 Z不是还可以用TGF-b来诱导，同时做，EMT好像对细胞珠有要求吧

markllq

回复 胡问成 的帖子8 c1 P% g3 [( \4 m9 c! y/ k* ~9 T( ?+ k
$ j' G- ]: Q1 O2 V' X  q
我们也试过tgfb，似乎细胞没有太大变化，似乎看不出明显的形态变化，你做过EMT吗？能不能交流一下？

yac508

你可以看看别人的文章，做EMT转化由很多的模型，从别人的文献中可以得到借鉴1 v- Z% V# w2 j: `  K
另外，做EMT的模型是对细胞有相应的要求，并不是所有类型的E型细胞都可以来做
4 U' ~9 [+ d( W6 \. B( g6 f据我了解，做EMT转化，肺癌细胞株A549 是一个很好的细胞系。结肠癌HT29不知道$ \0 }  @) s4 ]3 \( }( H
是否可以诱导

markllq

回复 yac508 的帖子
* d. X6 t8 t  \) @+ [; Y6 w
1 v2 o8 |; `) h' X0 c$ ]! _  r非常感谢！我们试过A549，用tgfb也诱导出来过，现在正在摸索HMLE细胞EMT的条件。希望能做出来。

windy19840

楼主，我现在也在做这方面研究，有机会多交流，我Q46942916.
% z) a2 [6 _& b/ o我主要研究TGF-b对EMT的效应。  F7 q6 V3 U# b6 u1 G
用nmumg、MCF10A或HDCK是常用的EMT模式细胞，但这几种细胞培养起来不容易，国内货源也很少，所以做EMT也不是很容易。
% x8 b+ P/ W1 Y+ D5 gHacat是一种研究tgf-b效应的模式细胞，相信如果是做TGF-b诱导EMT是可以成功的。
: h; u* `# J' I1 t( X弱弱的问一句楼主，还有能否问一下你的HMLE细胞能否赠送一些？

markllq

回复 windy19840 的帖子2 C" ], M" K/ L& t" U3 u% m
1 {0 y# ?3 u3 I, H
你好，我的model现在已经建立好了也比较稳定，其他的细胞系也尝试过。HMLE的细胞我们这里冻了很多，但是毕竟是其他实验室赠送的，我们没有权利再次转赠。你如果真需要的话，建议跟weinberg发封邮件找他们借，weinberg人很nice，他们这株细胞已经借给了很多实验室，他应该不会拒绝。HMLE的细胞系缺陷还是很大的，首先是增殖非常缓慢，诱导一轮EMT下来需要半个月时间，其次是EMT效率不高，很多细胞都不能响应。因此可能有表型也难看出差异，用其他细胞系可能更容易做出表型。

windy19840

回复 markllq 的帖子% J) d0 I3 t8 a1 h& e
/ [) U$ E& E: ~2 |/ T1 k
细胞从国外运到国内是很不方便的，我不知道你们当时weinberg是如何送给我的呢？
  C' o% G- [' h$ A' k! B7 o6 P还有，你现在主要的诱导模式是什么？是tgf-b还是细胞基质或者什么？* [5 j+ `; o. f8 t4 X6 B# ], E! c
在此请教了，期待回复，谢谢！

markllq

回复 windy19840 的帖子  ^+ r3 n  V. g# A% e8 _" ]

; A3 j  W2 Q6 N. K6 o) |- }! w他们是直接用干冰寄过来的，一两个星期就到了。这种细胞可以用tgfb直接诱导，或者过表达snail和twist都可以。

hunter_33

( e, ^( A6 Y+ k* p% R. X4 ~
9 ?7 n8 w8 d. e& ^你好，我在论坛里看见你的在用weinberg 的HMLE cell line 诱导EMT，这是一株非常神奇的细胞系，我想请问一下你们是用什么培养基培养的？我们这总是养不好，状态很差。