有诱导过EMT的经验人士吗？能不能讨论一下，

细胞海洋

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$ D9 M8 T" r# E建议你发新帖提问
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markllq

回复 hunter_33 的帖子6 _8 l1 a7 e1 m4 Z/ m2 d3 K

, C$ y: O' j; M$ o0 Q5 i用的培养基是严格按照weinberg lab的配方配的，不能见血清。细胞不会很纯，会有一些自发EMT，所以里面有一点点mesenchymal细胞也是正常的。你可以通过消化时间的长短或者用MSC把少量的masenchymal去掉。细胞状态跟细胞密度也是有关系的，细胞大概在70%的密度是长得最好，其他的密度不是很好看。

hunter_33

我查到的Weinberg 他们文章中一般是用MEGM培养基养的，有篇文章不知道是不是为了省钱用MEGM和DMEM+10%的两种培养基1:1 混合培养。我们实验室没有MEGM,所以是用MCF-10A的标准培养基来养HMLE，但是状态非常差，请问你们养出来的形态是附件中那样的吗？谢谢！

hunter_33

* J6 B* S4 s3 V) d' b2 w& b, m
' o5 S+ r% ~0 }我查到Weinberg他们文章一般是用MEGM培养基，但是我们实验室没有，所以用的MCF-10A 的标准培养基（DMEM-F12，5%horse serum,10ug/ml insulin,20ng/ml EGF, 100ng/ml choleratoxin, 0.5ug/ml hydrocortiston），这个培养基我们通常用来养10A和另外一个正常乳腺上皮细胞都很好，但是养HMLE就很糟糕。你们是用MEGM养的吗？不知道你们细胞的形态是不是附件中的那样子？（从Weinberg 文章中copy的）。谢谢！

markllq

回复 hunter_33 的帖子4 o3 ^5 P) A, s9 H. ?2 Y2 c" R% B

* h- _; o; t: r8 _7 t去掉血清，这个细胞不能见血清。用snail和twist诱导EMT时也不能加血清，但是用tgfb诱导时，可能要加少量血清，不然细胞会死。

细胞海洋

回复 hunter_33 的帖子) A, `5 b* C% w4 q) w, J9 n

5 M4 a6 C! D0 @3 K9 f' [. H% [! J建议你发新帖提问

hunter_33

回复 markllq 的帖子& n7 d7 `( e- |

7 h$ T9 n6 s0 l- l没血清可以长吗？你们是用MEGM培养基吗？

markllq

回复 hunter_33 的帖子. n; k' }3 m* F8 h

7 ]/ J7 \+ q$ q) l* [我们用的是这个培养基，可以自己配啊。没血清可以长，只是会比较慢。所以用这个细胞诱导EMT的周期是比较长的，大概半个月

hunter_33

回复 markllq 的帖子& n0 {, @* ~/ V: D7 q4 {

* k2 x0 V4 P8 y/ M啊，可以自己配啊，能告诉我你们的配方吗？我只查到可以买，但是很贵又要等很久。% z4 N5 |( x# N) C6 T* j8 l0 Z' n8 U  W
我们实验室一般用MCF-10A诱导EMT，还是比较容易的，而且形态变化明显，TGF-b处理4,5天就可以了。

markllq

回复 hunter_33 的帖子  c6 B8 V7 G6 Y/ O# i" i

) d( M5 i- p5 a给我你的邮箱，我把配方发给你。