oct4 基因在普通细胞中表达吗

fanmihu1987

近日在普通细胞中提取RNA，反转录，扩增出OCT4 NANOG 基因。求指点

frankieisme

MEF细胞我做过,是扩不出来的 .

snokey

一些成体干细胞中有低水平的OCT4A表达，但是随传代次数增加而降低。

snokey

OCT4分OCT4A,OCT4B和OCT4B1三种，另外OCT4有6个假基因。一般文献中的引物使用的引物大部分都没有区分出OCT4A, OCT4B，OCT4B1和假基因。只有OCT4A和干细胞的多能性相关，而很多细胞中都可以检测到OCT4B和OCT4B1，所以你检测到OCT4并不奇怪。关键要看你的引物设计的位置在哪里。OCT4中之用OCT4A含有第一个外显子，所以OCT4A特意性的引物一定要跨第一个外显子。另外，即使你可以区分OCT4A和其他异构体，但很难彻底避免PCR会扩增出非特异性条带，因为OCT4假基因和OCT4A的序列同源性至少大于97%。唯一可靠的是功能实验，因为OCT4A是转录因子，在核里，OCT4B不起转录因子的作用（在细胞质里），假基因没有蛋白产物。
2 C  p# W  C( [% p, S

liufutang

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1 s  [$ ?" p- v5 L
. V! z3 z+ z* i+ S% R( x- O哈哈 这个我还没试过哈

新疆八钢

回复 liufutang 的帖子2 z3 P5 e+ w1 C! [( H9 a0 W5 |

) r9 M! d. a3 z7 K$ R胰腺癌细胞系：Bxpc-3,Panc-1

liufutang

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+ |# F& G; P! ]
3 R& A0 L* ]$ D* {你检测过什么肿瘤细胞系表达OCT4呀？我检测的只有在畸胎瘤中表达

jefferson

fanmihu1987 发表于 2012-3-28 16:04 ! {0 a4 |! }( f1 r  l
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% {% b% E% Q7 |/ R3 U; b% P" B4 w& V. \7 v
谢谢您的回答，还想请教细胞污染指的是什么？

8 N4 S. W  d3 I+ K8 N
不知道你的胎儿HDF是自己分离的，还是细胞株  X; {( z7 Y/ L( L2 S, e
4 E7 e- L' K9 k% z) z& q
由于OCT4在干细胞或者生殖系细胞中都高表达，NANOG在一些成体组织中也有表达，因此如果是自己分离的胎儿HDF，有可能一起分离到了出HDF之外的其他组织细胞，而这些细胞或有可能就表达OCT4或NANOG。
3 I( s: @' ~4 |: p# B' j. w3 N9 }. S6 m' h2 t) _# D8 |
不过个人认为，RT-PCR引物设计不当，扩增出假基因的可能性很大，建议看下那两篇文献。

tinatina

狭义： 细菌，真菌，病毒，支原体，衣原体* [5 Q. I  w7 m
广义： 杂细胞，非目标细胞，不正常分化

fanmihu1987

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+ W! n' G8 c3 y4 Z
/ a) N" C0 F" A9 V' W谢谢您的回答，还想请教细胞污染指的是什么？