人原代脂肪干细胞培养不贴壁，求救！

alexsenla

最近分离培养人的脂肪干细胞，按照文献的步骤详细操作
# i6 W5 c& q" u7 o' V分离出来看到大量小圆型细胞，培养2天后只有极少数细胞贴壁
$ N: \* M# @. Y现有如下问题：, K2 j# Z* X5 U) g( B4 u
1：是否必要用红细胞溶解液？网上观点不一，而且没有找到现成的红细胞裂解液。 1 [% [0 F! k) k
2：脂肪干细胞不贴壁的原因是什么？我们用的hyclone的培养液+10%hyclone的血清。 6 X$ J, Z1 Z5 |7 ?) @2 i4 r# M
3：用胶原酶溶解组织的时间多久为佳？我们用的0.075%sigma的胶原酶，按文献的半个小时溶解得并不理想，要延长至60min才能见到糊状的组织。溶解时间过长是否影响细胞贴壁？
7 j+ v& s  k/ X" b4：细胞接种的密度多少合适？之前都没有计数，大概在高倍镜下可以见到10个左右的细胞，后来就越来越少。
* D2 V* c, x' ?  w: }离心速度是800rpm  5min9 y( _5 T* l; w& c# M' C

. C% o) L) o: x; {; m真心请教，请高手们帮忙！

luckywen

不知道你的细胞培养板选择是否合适。

alexsenla

培养板使用的corning的，还有什么讲究吗？刚开始接触细胞培养，需要学习的东西太多

初学者

路过，我也是新手。加油啊

细胞海洋

回复 alexsenla 的帖子! s% N3 V  a$ B5 T2 a) X1 E" `

& S6 P6 I2 @' X) F: O3 N3 N你询问谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
' L' J1 H" S& X1 X1 ~2 b
$ \1 P' T, q$ a7 |4 `) e/ L. G' A否则他看不到你的提问

Demon_CN

脂肪间充质干细胞7 ~$ Z' P  @* |- W
1、一般抽脂的时候需要把脂肪颗粒打碎，方便消化; v& ?) U. C: ^. X5 r: J
2、向有脂肪组织的试管中加入与组织量相同大约5ml左右的消化液（胰酶，I型胶原酶，以1：1比例混合配制而成），将试管放入37°C恒温摇床中震荡消化30min。
3 f  x) g: p4 a5 W3、分层取单核细胞群' e5 }% u7 d5 {0 d' r* B6 Q6 P
4、接种密度大概10000cells/m28 M6 @6 D; r! L( t9 }- w; v* M3 `
注意耗材的选用，我们实验室一般用经过TC处理的康宁培养瓶，有助贴壁