hiPS复苏后不增殖

573639471

hiPS复苏在灭活的CD-1 MEF上，复苏贴壁率比较高，每天换液，我有下面三个问题：% B6 z! E# `4 f# ~$ n7 z: C' o
1、10天后克隆不增长，并且出现不同程度分化（如前四图），大家觉得我feeder还是哪里有问题？
5 _' _/ r# S; [; {+ t2、有很少的比较规则的克隆，如第5、6图红圈所示，大家看看这些克隆挑留可以吗
# u; w* B2 W+ e6 s& r; k$ v3、为什么板上总会有些如最后一图红圈所示的杂碎细胞呢？这些是分化的吗

573639471

回复 xiaxin1900 的帖子  _* P, {5 d" E5 z  w( t

* \! E$ j% `; M) H( [  L据说有支原体污染的环境是绝对养不起来的 果真吗？

xiaxin1900

检查一下支原体看是否有支原体污染，这个很影响hES的增殖，而且会使细胞分化。

playboy723

你养的细胞分化了  干嘛不提早传代呢？  养了几天了？

dilal

第6张图很像是诱导分化的EB，hiPSC一般一周传代一次，最好不要超过10d，因为处理后的饲养层状态最多维持10天

song58

回复 573639471 的帖子% k; M  @7 A# R" Z, A7 O

! n4 `2 S: P1 B1、个人感觉第三图里克隆看着还行，尤其是那个小的克隆，值得持续观测。' [. v; O7 S$ x, H9 W
2、第六图红圈标注的克隆，如果是我的话我可能就不要了，看着就不太像...5 t6 d! i0 A4 o
3、是分化细胞，感觉有点像倒退回去的EMT过程中的细胞...
5 Z3 c2 h: ]. J, f
1 L% y& i4 y! X  Q, |7 l# x补充内容 (2012-4-9 17:06):
4 l  ~- P$ @1 `第五图，clone1 左上角那两个克隆我觉得应该好好关注。我有一次复苏iPS就是这些看着小的克隆后来长了起来，一直长了2周才扩起来。