hiPS复苏后不增殖

573639471

hiPS复苏在灭活的CD-1 MEF上，复苏贴壁率比较高，每天换液，我有下面三个问题：4 V* Q7 n& \9 X
1、10天后克隆不增长，并且出现不同程度分化（如前四图），大家觉得我feeder还是哪里有问题？' L6 J9 O3 e( a8 m
2、有很少的比较规则的克隆，如第5、6图红圈所示，大家看看这些克隆挑留可以吗
. f. `3 m6 h) v" P% X% a* I  D! v# R3、为什么板上总会有些如最后一图红圈所示的杂碎细胞呢？这些是分化的吗

song58

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; k9 A  d, p4 o* J5 W& U. z5 b/ ~! h- V; C0 J
1、个人感觉第三图里克隆看着还行，尤其是那个小的克隆，值得持续观测。* o; Z& \2 Q1 L4 c3 J
2、第六图红圈标注的克隆，如果是我的话我可能就不要了，看着就不太像...
& i; f: U2 J% l  `# D3、是分化细胞，感觉有点像倒退回去的EMT过程中的细胞...% ^- Z( J( E2 O5 D7 ]4 Y! Y
* T( t4 `1 X( Q" H1 R
补充内容 (2012-4-9 17:06):
" o$ \" e6 d: h. a4 ]9 }第五图，clone1 左上角那两个克隆我觉得应该好好关注。我有一次复苏iPS就是这些看着小的克隆后来长了起来，一直长了2周才扩起来。

dilal

第6张图很像是诱导分化的EB，hiPSC一般一周传代一次，最好不要超过10d，因为处理后的饲养层状态最多维持10天

playboy723

你养的细胞分化了  干嘛不提早传代呢？  养了几天了？

xiaxin1900

检查一下支原体看是否有支原体污染，这个很影响hES的增殖，而且会使细胞分化。

573639471

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+ }: A( }, `3 d5 X8 I* N7 G% G" p( H+ E5 U
据说有支原体污染的环境是绝对养不起来的 果真吗？