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关于MEF饲养层，急急急！   [复制链接]

YLL824WAN

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楼主
发表于 2012-4-15 22:54 |只看该作者 |正序浏览 |打印
  本人最近实验频频出问题，很是烦躁啊！望高人指点：之前用昆明白做的MEF饲养层细胞，养到第三代时用丝裂霉素C处理后冻存，用的是60%DMEM+30%FBS+10%DMSO，最近复苏了9管，只有5管贴壁，另外4管一点都没贴，肉眼观可见培养基呈黄色浑浊，还可见白色小絮状一样的漂浮物。给贴壁的5管换液后开始每天收集条件培养基，可才到第4天，培养皿中培养基镜下看全为泥沙似的东西，很细密，细胞形态也变得不一样了，肉眼观也是黄色浑浊一片，用PBS反复洗了4次后换液，第二天又成那样了。后来又复苏了两次，也都是不贴壁，但这些细胞不是一次冻存的，而且冻存方法应该没问题，真的很不解啊！各位大侠都来指点一下哦！感激涕零啊！
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frankieisme

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优秀会员 金话筒

15楼
发表于 2012-4-25 05:48 |只看该作者
你的情况100%被污染了.feeder细胞最好用C57小鼠做,而且最好用5代内的,那就意味着不需要大量冻存,小量冻存以防老鼠怀孕失败.还有用丝裂霉素处理的MEF细胞可以保持1周左右的时间.
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YLL824WAN

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14楼
发表于 2012-4-24 10:54 |只看该作者
回复 雪国叶子 的帖子& e2 G4 s( m% W: u7 y
/ G6 v0 I7 n' a5 T
好的，学习了，多谢啊
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雪国叶子

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13楼
发表于 2012-4-18 10:00 |只看该作者
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我们用的也是10%的DMSO和90%的血清 一直很好 没有出现楼上的状况
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雪国叶子

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12楼
发表于 2012-4-18 10:00 |只看该作者
我们用的也是10%的DMSO和90%的血清 一直很好 没有出现楼上的状况
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YYQ6301

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11楼
发表于 2012-4-17 09:06 |只看该作者
肯定是污染了
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YLL824WAN

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10楼
发表于 2012-4-16 15:06 |只看该作者
啊？？？完了……好的，谢谢各位啦！我赶紧处理去。
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genedu

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金话筒 优秀会员

9楼
发表于 2012-4-16 13:55 |只看该作者
细胞污染，建议全部清除！做好除菌准备！防止大规模扩散
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sizhengliu

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8楼
发表于 2012-4-16 09:59 |只看该作者
注意了，肉眼观浑浊，镜下黑点泥沙状，可能是冻存时被细菌污染了。
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懵懂干细胞

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优秀版主 帅哥研究员 积极份子 小小研究员 金话筒

7楼
发表于 2012-4-16 09:07 |只看该作者
黄色浑浊一片应该是污染了 不贴壁原因很多
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